[发明专利]经修饰的ACE2多肽

说明书

发明领域

本发明涉及经修饰的血管紧张素转换酶2（ACE2）变体及其药物和分析用途。特别地，本发明涉及Zn²⁺耗尽、不含Zn²⁺、混合金属和金属离子取代的ACE2，以及用于制造这些变体的方法及其用途，例如这些ACE2变体的治疗和分析用途。

发明背景

ACE2（血管紧张素转换酶2，也称为血管紧张素转换酶相关羧肽酶；酶学委员会编号：3.4.17.23）是肾素血管紧张素系统（RAS）的关键金属蛋白酶，参见Donoghue等人，Circ.Res.87，2002:e1-e9；Tipnis等人，J.Biol.Chem.，275（43），2000，33238-43）。ACE2最初鉴定为ACE类似物。Tipnis等人描述了来自CHO细胞的ACE2（在所述情况下仍被称为ACEH）分离及其cDNA分离。

ACE和ACE2两者均为在中心处具有催化锌原子的金属蛋白酶。ACE和ACE2随后发现在活性以及机制方面是不同的。ACE增加血压，而ACE2降低血压。在机制上，ACE是肽基二肽酶，而ACE2是羧肽酶（Towler等人，J.BiolChem279，2004，17996-18007）。

ACE2主要作为膜锚定的锌金属蛋白酶存在，其在血液循环中起作用，并且诱导受累器官中的局部效应，以及经由血液循环的全身效应。ACE2在脉管系统以及大多数器官中表达，但占优势地在肾、肝、心脏、肺和睾丸中表达。它作为单肽酶切割，从而使多种底物活化或失活，所述底物包括RAS的肽，例如血管紧张素II（AngII），其被切割为血管紧张素1-7（Ang1-7），以及血管紧张素I（AngI），其被切割为血管紧张素1-9（Ang1-9），以及Apelin、强啡肽原、去-Arg-缓激肽及其他（Vickers，C.等人，J.Biol.Chem.，277，2002，14838-14843）。ACE2作为针对ACE-AngII-AT₁受体轴的反调节剂在RAS内起关键作用。ACE2通过从由血管紧张素II介导的促炎、高血压、增殖和血管收缩轴转变为反调节轴而起作用，所述反调节轴通过经由ACE2切割AngII生成Ang1-7（Danilczyk，U.&Penninger，Circ.Res.，98，2006，463-471；Vickers，C.等人，J.Biol.Chem.，277，2002，14838-14843），以及更少程度地，通过ACE2切割AngI生成Ang1-9而触发。ACE2视为重要的稳态调节物（Ferrario，C.M.,等人，J.Am.Soc.Nephrol.，9，1998，1716-1722）。ACE2的催化活性对于AngII比AngI高大约400倍（Vickers，C.等人，J.Biol.Chem.，277，2002，14838-14843）。可溶形式的ACE2也在循环中发现，其缺乏跨膜结构域。这种可溶形式比膜结合形式更适合用作广泛多样的治疗方法中的活性化合物。

可溶和重组形式的ACE2已得到开发，以治疗危害生命的疾病，例如急性肺和心脏状况，以及纤维化和肿瘤学疾病。

ACE2作为ACE2反调节剂的功能首先在国际专利申请公开号WO2004/000367中报道。该申请公开了各种疾病的治疗处理，例如高血压、充血性心脏衰竭、慢性心脏衰竭、急性心脏衰竭、心肌梗塞、动脉硬化和肾功能衰竭、以及肺疾病包括成人呼吸窘迫综合征（ARDS）。

国际专利申请公开号WO2004/023270描述了ACE2的结晶化。

国际专利申请公开号WO2008/151347和美国专利申请公开号US2010/310546描述了ACE2糖基化和ACE2二聚体。

测定ACE2活性的方法例如在国际专利申请公开号WO2008/046125A和美国专利申请公开号US2010/0261214中描述。

国际专利申请公开号WO2009/086572描述了ACE2在治疗肝疾病特别是炎性肝疾病和纤维化中的用途。

国际专利申请公开号WO2009/076694描述了使用ACE2的免疫疗法。

国际专利申请公开号WO2009/124330描述了使用ACE2治疗各种肿瘤。

ACE2描述为含锌金属蛋白酶，所谓的锌蛋白酶。用于临床使用的目前完全活性的制剂含有等摩尔锌/蛋白质比。锌由此在酶的活性中心络合。药物产品制剂通常补充有ZnCl₂，以通过抑制酶结合的锌的丧失来稳定酶促活性。

发明概述