[发明专利]细胞培养方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年3月14日提交的美国申请号13/829,249的权益，该申请的内容特此以其全部内容结合在此。

发明领域

本发明总体上涉及细胞培养方法。

背景

治疗性多肽是一类重要的治疗性生物技术产品，并且治疗性抗体(包括鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体以及它们的片段)占据了治疗性生物产品的大多数。

概述

在一个方面中，本发明的特征是一种产生具有高甘露糖聚糖、半乳糖基化聚糖、以及岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的目标值的重组蛋白制剂的方法，该方法包括：(a)提供一种被基因工程化为表达一种重组蛋白的细胞；(b)在该细胞表达该重组蛋白的条件下在包含(例如，补充有)铵的培养基中培养该细胞；并且(c)收获(例如，从该细胞和/或培养基中纯化或分离)由该细胞产生的重组蛋白制剂，其中该制剂具有高甘露糖聚糖、半乳糖基化聚糖、以及岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的目标值。在一些实施例中，该培养基包括铵，铵存在的时间和数量有效于修饰(例如，增加或减少)该重组蛋白中的高甘露糖聚糖、半乳糖基化聚糖、以及岩藻糖基化聚糖中的一种或多种。

在一些实施例中，该培养基包括至少约1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、或更多的铵。在一些实施例中，该培养基包括约1mM至约50mM铵，例如，约1mM至约10mM铵、约10mM至约20mM铵、约11mM至约19mM铵、约12mM至约18mM铵、约13mM至约17mM铵、约14mM至约16mM铵、约20mM至约30mM铵、约30mM至约40mM铵、约40mM至约50mM铵、约1mM至约25mM铵、约25mM至约50mM铵、约1mM至约20mM铵、约1mM至约30mM铵、约1mM至约40mM铵、约10mM至约50mM铵、约20mM至约50mM铵、或约30mM至约50mM铵。

在一些实施例中，该目标值是一种参考治疗性产品中的高甘露糖聚糖、半乳糖基化聚糖、以及岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的水平。在一些实施例中，该目标值是一种参考治疗性抗体产品中的高甘露糖聚糖、半乳糖基化聚糖、以及岩藻糖基化聚糖中的一种或多种的水平。在一些实施例中，该目标值是一个预先确定的药物产品规格或一种药物制剂的质量控制标准，例如分析证书(CofA)、检测证书(CofT)或主生产批记录(MasterBatchRecord)。在一些实施例中，该产品规格是FDA标签、医嘱、USP专论或EP专论中的一个产品描述。

在一些实施例中，该参考治疗性产品选自下组，该组由以下各项组成：阿巴西普、阿昔单抗、阿达木单抗、阿柏西普、阿法赛特、阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、贝拉西普、赛妥珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依那西普、吉姆单抗、替依莫单抗、英利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗；帕木单抗、雷珠单抗、利洛西普、利妥昔单抗、托西莫单抗、以及群司珠单抗。

在一些实施例中，该目标值是以下各项中的一个或多个：(a)至少约0.1％至约20％高甘露糖聚糖，例如，至少约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、或更多的高甘露糖聚糖；(b)至少约1％至约95％半乳糖基化聚糖，例如，至少约1％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、或约95％的半乳糖基化聚糖；以及(c)至少约70％至100％岩藻糖基化聚糖，例如，至少约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、或约100％的岩藻糖基化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如HM3、HM4、HM5、HM6、HM7、HM8、HM9或它们的组合。