[发明专利]DNA构建体和制备具有条件突变型Acvr1等位基因的小鼠的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请是2013年3月13日提交的US 61/778,814的非临时申请，其出于所有目的通过引用整体并入。

以计算机可读形式存在的序列表的引用

本申请包括2014年2月21日创建的大小为1千字节的文本文件 439616SEQLIST.txt(其通过引用并入)中的序列。

领域

具有Acvr1基因的突变型等位基因的经遗传修饰的非人动物；包含Acvr1基因的条件突变体的核酸构建体；展示进行性骨化性纤维发育不全(FOP)的表型特征的非人动物。展示异位骨形成的经遗传修饰的小鼠。含有子宫外但非子宫内表达的条件突变型ACRV1等位基因的非人动物。

背景

Acrv1是骨形态发生蛋白(BMP)的I型受体。人Acvr1基因中的某些突变，包括产生氨基酸修饰R206H突变的突变，与疾病进行性骨化性纤维发育不全(FOP)强相关(参见，例如，美国专利申请公开号 2009/0253132；也参见，Pignolo,R.J.(2011)Fibrodysplasia Ossificans Progressiva:Clinical and Genetic Aspects,Orphanet Journal of Rare Diseases,6:80,1-6)。R206H突变，除其它以外，据信增强受体对活化的灵敏度并且使其对沉默更具抗性。在Acvr1中具有R206H突变的嵌合小鼠发展FOP样表型(参见，例如，Chakkalakal等人(2012)An Acvr1 R206H knock-in mouse has fibrodysplasia ossificans progressiva,J. Bone and Mineral Res.27:1746-1756)。

Acvr1中的某些突变，例如导致R206H Acvr1蛋白突变的那些突变，在小鼠中是围产期致死性的。当突变是围产期致死性时，不可能通过非人动物的种系传递包含突变的敲入基因。例如，上述研究需要利用嵌合小鼠的工作，所述嵌合小鼠在一些细胞中具有指定的突变，但不能在种系中传递该突变；因此，还未建立在种系中包含R206H 突变的稳定且有用的小鼠品系。仍然存在对可在种系中传递是围产期致死性的或胚胎致死性的ACRV1突变以产生用于例如产生非人动物 (其展示与ACRV1突变相关的表型例如FOP、FOP特征，或相关病症的特征、或相关病症)的后代的非人动物的需要。

概述

提供了在它们的种系中包含含有Acvr1基因的修饰的核酸序列的经遗传修饰的非人动物。

提供了在它们的种系中包含含有Acvr1基因的条件遗传修饰的核酸序列的经遗传修饰的非人动物，其中所述遗传修饰使得非人动物易于异位骨形成。

提供了在它们的种系中包含含有包含条件突变型Acvr1外显子的条件遗传修饰的核酸序列的经遗传修饰的非人动物，其中条件突变型 Acvr1外显子的表达的诱导赋予非人动物对异位骨形成的易感性。在一个实施方案中，所述突变型Acvr1外显子是外显子5。在具体实施方案中，所述突变表达具有拥有R2026H突变的外显子5的Acvr1- 编码的蛋白。

提供了条件地表达突变型Acvr1等位基因的非人动物。在不同方面，突变型Acvr1等位基因是赋予表达所述等位基因的非人动物病理表型的等位基因。在不同方面，非人动物包含上游和下游侧翼连接有位点特异性重组酶识别位点(SRRS)的Acvr1等位基因的突变型外显子，并且非人动物包含识别SRRS的重组酶，其中所述重组酶是可诱导的。

提供了包含引起(在一个实施方案中，在杂合子中；在一个实施方案中，在纯合子中)、促进非人动物异位骨化、或使非人动物对异位骨化易感的Acvr1等位基因的修饰的非人动物。

提供了包含Acvr1等位基因的条件突变的非人动物，其中所述突变型Acvr1等位基因不在子宫内表达，并且不在围产期表达，并且其中所述非人动物以条件方式表达突变型Acvr1等位基因，其中所述条件表达通过向非人动物施用目标化合物来诱导。

提供了包含条件突变型外显子的修饰的Acvr1基因座，其中所述条件突变型外显子在实验性诱导的诱导后表达。

在一个方面，提供了经遗传修饰的Acvr1基因座，其以反义方向包含突变型外显子，在上游和下游侧翼连接SRRS。在一个实施方案中，所述基因座存在于非人动物中，所述非人动物还包含识别侧翼连接所述突变型外显子的SRRS的诱导型重组酶基因。