[发明专利]蛋白质标准品

说明书

本文公开了用于凝胶电泳的蛋白质标准品。所述标准品可采用多种方案检测。这些方案包括，例如，观察共价连接至所述标准品的蛋白质的染料、卟啉或卤烷基化色氨酸残基发出的颜色或荧光；或检测通过多肽表位或亲和标签结合至所述标准品的蛋白质的抗体或其它结合伴侣发出的荧光或化学发光。所述蛋白质标准品包含多个蛋白质组，各组对应于不同的凝胶条带，并且组内的蛋白质可用一种或多种方案检测。

相关申请的交叉参考

本申请要求2013年3月14日提交的名称为“PROTEIN STANDARD(蛋白质标准品)”美国临时专利申请号61/784,242的优先权，其通过引用纳入本文用于所有目的。

发明背景

蛋白质凝胶电泳是分子生物学研究、制药和其它企业广泛应用的技术。该技术可用于分析生物样品的蛋白质含量，或纯化足够量的感兴趣蛋白质供于后续应用。蛋白质凝胶电泳的基础方面是检测所述凝胶中的样品蛋白质，这允许表征这些蛋白质的分子量、纯度、氨基酸含量等。为协助所述表征，本领域技术人员常常利用蛋白质标准品—一组良好表征的蛋白质，伴随样品蛋白质在凝胶中跑动。

新技术已使电泳后的蛋白质检测具有更高灵敏度、更高特异度和更低成本。这些技术中的许多都要求待检测的蛋白质具有特定特征，例如特定的氨基酸基序或共价连接的化学基团。

发明内容

本文提供蛋白质标准品，检测蛋白质标准品的方法，和用于检测蛋白质标准品的试剂盒。

提供用于凝胶电泳的蛋白质标准品。在一些实施方式中，所述标准品包含多个蛋白质组，各组对应于不同的凝胶条带，其中至少一组包含标记的蛋白质，所述标记的蛋白质包含(i)色氨酸残基，和(ii)标记物，所述标记物与卤烷基化色氨酸在光谱上不同。在其它实施方式中，所述标准品包含多个蛋白质组，各组对应于不同的凝胶条带，其中至少一组包含未标记的和标记的蛋白质的混合物，所述未标记的蛋白质包含色氨酸残基，而所述标记的蛋白质包含与卤烷基化色氨酸在光谱上不同的标记物。

所述色氨酸残基可共价连接至卤代烷烃。所述卤代烷烃可具有一个或两个碳原子或可选自下组，包括但不限于：三氯乙醇、三氯乙酸、氯仿和溴仿。

在所述蛋白质标准品的一些实施方式中，所述标记的蛋白质的标记物是共价连接至卟啉的氨基酸残基。在其它实施方式中，所述标记物是共价连接至染料的氨基酸残基。

所述染料可选自下组：单蓝A(Uniblue A)、中性红、QXL610、QXL670、 RGA黄、DEAC、NBD-X、氟硼二吡咯(Bodipy)TMR-X、氟硼二吡咯TR-X、氟硼二吡咯530、氟硼二吡咯R6G、氟硼二吡咯493、丹磺酰-X、氯高铁血红素和原卟啉IX。所述染料可以有颜色或发荧光。在一些情况中，所述染料是荧光染料，并且所述染料的激发和发射光谱的峰落在可见光谱之内。

在所述蛋白质标准品的一些实施方式中，所述标准品的2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11或12个蛋白质组包含如上所述的混合物。在其它实施方式中，所述标准品的所有蛋白质组包含所述混合物。而在其它实施方式中，所述标准品的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个蛋白质组包含如上所述的含有色氨酸残基的蛋白质。在其它实施方式中，所述标准品的所有蛋白质组包括含有所述色氨酸残基的蛋白质。而在其它实施方式中，所述标准品的2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11或12个蛋白质组包含如上所述的含有标记物的蛋白质。而在其它实施方式中，所述标准品的所有蛋白质组包括含有所述标记物的蛋白质。

第一蛋白质组的蛋白质的标记物可以与第二蛋白质组的蛋白质的标记物在光谱上不同。所述至少一组中标记的蛋白质还可包含(以平均计)，少于2、5、 10或20个所述标记物/分子。或者，所述至少一组中标记的蛋白质可包含(以平均计)，多于2、5、10或20个所述标记物/分子。