[发明专利]在被孢霉属微生物内显示高表达活性的启动子

说明书

本发明的课题在于提供一种在被孢霉属微生物内显示高表达活性的启动子。本发明提供含有选自序列号1～28中的任意一个的碱基序列的多核苷酸或其突变体。

技术领域

本发明提供在被孢霉(Mortierella)属微生物细胞内显示高表达活性的启动子、含有该启动子的载体、导入了该启动子的非人转化体以及使用该启动子或转化体的蛋白质、脂质或脂肪酸的制造方法。

背景技术

一直以来开发并实用化了通过微生物代谢来生产有用化合物的技术(广义的发酵技术)。例如，高山被孢霉(Mortierella alpina)等被孢霉属的菌类，是已知的生产以花生四烯酸为主的高度不饱和脂肪酸(PUFA)且在工业上特别有用的菌类(专利文献1)。

在利用这种菌类方面，已做了育种工作，即把有用生物的遗传性改良为更理想的特性(进行品种改良)。尤其在发酵技术中，从提高由微生物生产有用化合物的生产效率以及降低该化合物的制造成本等的观点出发，育种已变得非常重要。

为了培育具有更优选特性的有用生物，已利用了介由转化的方法。这种情况下，为了获得目标性状，将编码必需蛋白质的DNA片段导入到想要培育的有用生物(宿主)中，以使其在适当的基因启动子的控制下进行表达，从而获得转化体集团。此后，从中筛选理想的品种(菌株)。此时，适应于成为宿主的生物种且适应于想要改变的特性的恰当的基因启动子是必需的。

关于属于被孢霉属的菌类的丝状菌的转化方法，已有多种技术被报导。另外，已获得了多种与被孢霉属菌类的脂质生产能力相关且参与脂质合成系统的酶基因。然而，针对用于将这些有用的酶基因导入被孢霉属内，并使之以高水平表达的必需的基因启动子，至今几乎未报导。

现有技术文献

专利文献

专利文献1日本国特开昭63-044891公报

发明内容

在如上所述的状况下，寻求高效地生产有用脂质的菌株的育种，为此，适于被孢霉属的菌类的基因启动子必不可少。

本发明者不断深入研究的结果，成功克隆了在高山被孢霉(M.alpina)中高表达的基因的启动子，从而完成了本发明。即本发明提供以下多核苷酸、表达载体、转化体、使用该多核苷酸以及转化体的蛋白质、脂质或脂肪酸的制造方法。

具体而言，本发明如下。

[1]一种多核苷酸，其特征在于，是选自以下(a)～(c)中的任意一项所述的多核苷酸：

(a)多核苷酸，其含有选自序列号1～28中的任意一个的碱基序列；

(b)多核苷酸，其含有相对于选自序列号1～28中的任意一个的碱基序列有90％以上的同一性的碱基序列，且在属于被孢霉属的微生物细胞内显示启动子活性；以及

(c)多核苷酸，其为与由选自序列号1～28中的任意一个的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交的多核苷酸，且为在属于被孢霉属的微生物细胞内显示启动子活性。

[2]根据[1]所述的多核苷酸，其特征在于，所述启动子活性是指在属于被孢霉属的微生物细胞内表达GUS报告基因时，至少500nmol/(mg·分钟)的GUS蛋白质活性被确认。

[3]根据[1]所述的多核苷酸，其特征在于，含有选自序列号1～28中的任意一个的碱基序列。

[4]根据[1]或[2]所述的多核苷酸，其特征在于，为DNA。

[5]一种载体，其特征在于，含有[1]～[4]中任一项所述的多核苷酸。

[6]一种非人转化体，其特征在于，导入了[1]～[4]中任意一项所述的多核苷酸。