[发明专利]通过序列特异性转肽酶制备免疫配体/效应分子结合物的方法

说明书

本发明涉及用于制备免疫载体/效应分子结合物的方法，该方法包括通过序列特异性转肽酶或其催化域将效应分子结合至免疫配体(图6b)。

技术领域

本发明涉及制备免疫配体/效应分子(payload)结合物的方法。

背景技术

目前用于标记蛋白和/或将分子结合至蛋白(尤其是当涉及小分子效应分子或标记时)的主要方法，包括在化学结合(conjugation)中使用特异性连接子(linker)分子，将效应分子共价连接至蛋白质的自由赖氨酸和/或半胱氨酸。

但是，许多蛋白质，例如免疫靶向策略中尤为感兴趣的抗体，都是较大的蛋白质，可能包含多个赖氨酸和半胱氨酸残基。由于连接子介导的化学结合是一种随机过程，因此，连接子介导的效应分子化学连接反应得到的是结合蛋白的不同种混合物，其在疗效和/或诊断用途上可能不同。显然，蛋白-效应分子结合物还给治疗性结合物的常规审批流程带来了显著困难，因为出于潜在安全顾虑，有关管理部门对其批次差异和/或活性药学成分(API)差异存在负面看法。

此外，若期望限定蛋白负载的效应分子比例，则常需要根据期望的结合化学计量配比来纯化结合物。这不仅枯燥，而且可能限制提高生产过程中的商品成本，因为通常仅有部分连接子介导的结合蛋白具有期望的效应分子比例。对治疗相关的抗体/药物结合物(ADCs)而言尤为如此，其中根据所用的毒素，3-4个毒素分子似乎较为有利，但在典型的连接子介导的化学结合反应中，存在每个抗体结合0-8个毒素的情况(Panowski et al.(2014))。

虽然存在上述缺陷，目前临床测试中所用的或由卫生部门批准用于疾病治疗的全部抗体/药物结合物，都是毒性小分子药物与抗体通过连接子介导的化学结合获得的(Lambert(2012)或Mullard(2013)).。

本领域的工业和科学专家们普遍认同，分子效应分子(包括毒性或标记分子)与免疫配体的位点特异性化学计量配比结合，与连接子介导的化学结合反应相比，具有显著优势。因此，存在以蛋白质结构中特定氨基酸作为化学结合反应目标的尝试(Panowski etal.(2014))。

一方面，尝试通过蛋白质结构中某些位置上的突变，来删除多余结合位点和/或提供作为连接子连接反应目标的期望结合位点(例如，赖氨酸和/或半胱氨酸残基)。

另一方面，尝试通过在某些位点加入非天然氨基酸，例如硒代半胱氨酸、对叠氮基苯丙氨酸或乙酰苯丙氨酸(Hofer et al.(2009),Axup et al.(2012),或Lemke(2011))，以控制化学结合反应。

但是，所有这些途径都改变了将结合的蛋白质主要氨基酸序列，可能造成不期望的功能性质。此外，上述非天然氨基酸的加入通常效率低下，且不能够对蛋白定量加入特异性标记位点。

发明内容

因此，存在克服随机结合方法的已知问题的迫切产业需求，尤其是对于治疗相关的免疫结合物的制备，包括但不限于ADCs。

因此，本发明的目标之一，在于提供一种联合免疫配体和效应分子(例如药物、毒素、细胞因子、标记等)以制备位点特异结合抗体药物结合物的高效方法，优选为将全长单克隆抗体结合至小分子量毒素。

本发明的又一目的在于，制备疗效更佳和/或生产再现性更高的免疫配体/效应分子结合物。

本发明的又一目的在于，允许以位点特异性和/或序列特异性方式，将效应分子与免疫配体结合。

本发明的又一目的在于，制备保存其组成部分的特征性质的免疫配体/效应分子结合物，例如靶向亲和性、靶向特异性、靶向敏感性、溶解性、药理学功能等。

上述目的通过独立权利要求的主题达成，同时，其优选实施方式进一步公开于从属权利要求及说明书中。

概念定义