[发明专利]融合混合物

说明书

本发明涉及用于在体内或者在体外修饰任意脂膜、细胞膜、细胞膜组成部分或者与细胞其余组成部分分离的细胞膜的含脂质的膜的融合混合物，以及涉及通过与该混合物融合修饰含脂质的膜的方法。

背景技术

对于治疗用途而言，存在着对将药学活性物质引入到目标细胞中的方法的需求。

由Khalil等人（I.A.Khalil，K.Kogure，H.Akita，H.Harashima，2006.UptakePathwaysandSubsequentIntracellularTraffickinginNonviralGeneDelivery.PHARMACOLOGICALREVIEWS，第58卷，第1期，32-45）已知，对于DNS可区分为胞吞和非胞吞吸收方法。在科学界中根据该评论文章认为，DNS的主要吸收方式借助脂质复合体（Lipoplexen）（也称为阳离子脂质-DNA复合体）以胞吞方式进行。细胞外大分子的囊泡吸收称为胞吞。据此，直至1990年代中期认为的在脂质复合体的脂质与细胞膜融合之后的大分子的直接吸收不能再站得住脚，而最多以极小比例参与。

Friend等人的论文为该假设提供了证据，其中通过电子显微照片展示了胞吞之后囊泡中的DNS（FriendDS，PapahadjopoulosD和DebsRJ（1996）Endocytosisandintracellularprocessingaccompanyingtransfectionmediatedbycationicliposomes.BiochimBiophysActa1278:41–50）。该吸收方式由Weijun和SzokaJr.证明（WeijunLi和FrancisC.SzokaJr.2007.Lipid-basedNanoparticlesforNucleicAcidDelivery.PharmaceuticalResearch，24，438-449）。

阳离子脂质可以用于制备阳离子脂质体。已知由这些起始成分形成阳离子脂质体难于控制，因为由这些起始物质可能形成不同的结构。因此，将阳离子脂质与作为所谓的辅助物脂质的中性脂质预先均匀地混合以形成脂质体，因为仅阳离子脂质明显不能够确保形成脂质体。如由上述Khalil等人的文献已知（Khalil等人，第40页，右栏，第一段），例如使用DOPE或者胆甾醇作为辅助物。

该辅助物脂质例如具有亲水性区域以及有或没有双键的疏水性区域（尤其C₁₀-C₃₀）。两种区域均具有中性性质。由此，中和了分子种类A的带正电的分子之间的大的电荷密度和排斥力。该作用导致该体系的稳定。因此，使用辅助物脂质是必需的，并且此外提高了该体系的转染效果。所述辅助物脂质的比例设定为直至最大70%重量/重量。合适的分子例如是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱（1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺、1,2-二-十八烯酰基（Dielaidoyl）-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺、1,2-植烷醇-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺或者1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰胆碱）。

具有中性辅助物脂质的带正电的融合混合物例如从WO2011/003406A2中已知。所公开的融合混合物在每种情况中基于由分子种类A（阳离子脂质）、分子种类B（荧光标记物）和分子种类C，即中性辅助物脂质构成的一种具体组成。在此，脂质体与在附着在细胞上的细胞膜及其质膜融合，其中建议分子种类A:B:C的比例为1:0.1:1重量/重量。

由Csiszár等人（CsiszárA.等人NovelFusogenicLiposomesforFluorescentCellLabelingandMembraneModification，BioconjugateChemistry，2010，21，537-543）已知融合的脂质体体系，其由阳离子的（分子种类A）、中性的（分子种类C）和芳族脂质（分子种类B）构成，并且其中分子种类A:B:C以1:0.1:1重量/重量的比例存在。使用DOTAP作为分子种类A，荧光亲脂性分子如DiO、DiR、氟硼二吡咯-、丽丝胺-罗丹明-和FITC-标记的脂质作为分子种类B。使用DOPE作为辅助物脂质C。该混合物用于构建脂质体，并且此外用于荧光细胞标记、蛋白质嵌入、细胞膜功能化、活性物质吸收、DNA-吸收等。作者特别地表示，仅这3种组分的协同相互作用产生有效融合的混合物。