[发明专利]用于体外干细胞增殖和组织再生的生长基质

权利要求书

1.一种培养干细胞的方法，其包括

制备多功能基质，其具有下列步骤：

干燥脱乙酰壳多糖溶液以形成脱乙酰壳多糖层；

用碱性溶液中和脱乙酰壳多糖层的酸度；

将生长促进蛋白结合配偶体附着至脱乙酰壳多糖层；

用京尼平将生长促进蛋白结合配偶体交联至脱乙酰壳多糖层；

施加生长促进蛋白的溶液；和

允许生长促进蛋白附着至脱乙酰壳多糖层；

接种一种或多种干细胞到多功能基质；和

在限定的饲喂条件下培养干细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中制备多功能基质还包括下列步骤：

施加附着组分的溶液；和

允许附着组分附着至脱乙酰壳多糖层。

3.如权利要求1所述的方法，其中生长促进蛋白结合配偶体是肝素、硫酸乙酰肝素或硫酸乙酰肝素的类似物。

4.如权利要求3所述的方法，其中生长促进蛋白结合配偶体是肝素。

5.如权利要求1所述的方法，其中在多功能基质上培养的干细胞保持多能和增殖状态而无任何可溶性生长促进蛋白。

6.如权利要求1所述的方法，其中干细胞选自胚胎干细胞、多能干细胞、成体干细胞、脂肪来源的干细胞、间质干细胞、造血干细胞、脐带血干细胞、少突胶质细胞祖细胞、FGF反应祖细胞、诱导的多能干细胞(iPSC)和iPSC来源的干细胞。

7.如权利要求1所述的方法，其中多功能基质是2维的，且干细胞选自hESC和iPSC。

8.如权利要求1所述的方法，其中多功能基质是3维的。

9.如权利要求1所述的方法，其中基质不包含异种组分。

10.如权利要求6所述的方法，其中干细胞是哺乳动物的，优选啮齿类的、灵长类的或人类的。

11.如权利要求1所述的方法，其中生长促进蛋白选自FGF、PDGF、EGF和HB-EGF。

12.如权利要求1所述的方法，其中FGF是FGF-2。

13.如权利要求2所述的方法，其中附着组分是选自纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、原纤蛋白、纤维蛋白原、纤溶酶原、纤维蛋白溶酶、聚蛋白多糖、短蛋白聚糖、肌腱蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸蛋白多糖、硫酸角质素蛋白聚糖、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸软骨素蛋白多糖、多配体蛋白聚糖-1(蛋白聚糖)和IGF结合蛋白的细胞外基质蛋白。

14.如权利要求2所述的方法，其中附着组分是具有包含RGD或IKVAV的肽序列的细胞外基质肽。

15.如权利要求1所述的方法，其中干细胞在3天内饲喂至多1次。

16.一种制备促进细胞递送到损伤组织的载体的方法，所述方法包括

使用电流产生具有30-100μm之间尺寸的脱乙酰壳多糖微球；

将生长促进蛋白结合配偶体附着至脱乙酰壳多糖层

使用京尼平将生长促进蛋白结合配偶体交联至脱乙酰壳多糖层；

施加生长促进蛋白的溶液；

施加附着组分的溶液；和

允许生长促进蛋白和附着组分附着至脱乙酰壳多糖微球。

17.如权利要求15所述的方法，其中生长促进蛋白结合配偶体是肝素，生长促进蛋白是FGF-2。

18.如权利要求16所述的方法，其中附着组分是纤连蛋白。

19.如权利要求16所述的方法，其中附着组分是包含序列RGD的肽。

20.如权利要求16所述的方法，其中附着组分是包含序列IKVAV的肽。

21.如权利要求16所述的方法，其中电流约25kV。

22.一种修复需要治疗的受试者的损伤组织的方法，方法包括：

制备如权利要求16所述的载体；

将干细胞接种在载体上并进行增殖；和

将具有增殖的干细胞的载体注射进需要治疗的受试者的损伤组织中；

其中所注射的载体促进组织的再生。

23.如权利要求22所述的方法，其中损伤组织是创伤性脑损伤。