[发明专利]使用体细胞核转移产生单性生殖干细胞和患者特异性人胚胎干细胞

权利要求书

1.一种产生单性生殖体衍生的人多潜能干细胞系(pn-hPSC)的方法，其包括：

通过在活化培养基中培育来活化卵母细胞；

通过在后活化培养基中培育所述活化的卵母细胞产生单性生殖体；

通过在培养基中培育所述单性生殖体形成胚泡；以及

从所述胚泡分离内细胞团(ICM)细胞，其中所述ICM细胞能够进一步培养为pn-hPSC细胞系。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述活化培养基包含钙离子载体。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述钙离子载体包括伊屋诺霉素、A23187、白僵菌毒素、X-537A和/或燕麦曲菌素。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述后活化培养基包含6-DMAP、嘌呤霉素、乙醇、放线菌酮(CHX)、曲古霉素A(TSA)和/或细胞分裂抑素B(CB)。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述后活化培养基包含不阻止第二极体排出的化合物。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述卵母细胞包括中期II(MII)期卵母细胞。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述卵母细胞包括中期I(MI)期卵母细胞。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述卵母细胞包括单原核卵母细胞。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系是杂合的。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系是纯合的。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系包含具有与至少1％的群体免疫相容的人白细胞抗原(HLA)单倍体。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述HLA单倍体包括HLA-A、HLA-B和HLA-DR。

13.如权利要求1所述的方法，其包括注射精子因子至所述卵母细胞。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述卵母细胞是在CARM1和/或Esrrb存在下培育。

15.一种单性生殖体衍生的人多潜能干细胞系(pn-hPSC)，其包括：

从单性生殖体衍生的胚泡的内细胞团(ICM)细胞分离的多潜能细胞。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述单性生殖体衍生的胚泡包含通过在活化培养基中培育卵母细胞所产生的单性生殖体。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述活化培养基包含钙离子载体。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述钙离子载体包括伊屋诺霉素、A23187、白僵菌毒素、X-537A和/或燕麦曲菌素。

19.如权利要求16所述的方法，其中所述单性生殖体衍生的胚泡包含通过在后活化培养基中培育活化的卵母细胞所产生的单性生殖体。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述后活化培养基包含6-DMAP、嘌呤霉素、乙醇、放线菌酮(CHX)、曲古霉素A(TSA)和/或细胞分裂抑素B(CB)。

21.如权利要求15所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系是杂合的。

22.如权利要求15所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系是纯合的。

23.如权利要求15所述的方法，其中所述pn-hPSC细胞系包含具有与至少1％的群体免疫相容的人白细胞抗原(HLA)单倍体的多潜能细胞。

24.如权利要求15所述的方法，其中所述多潜能细胞表达来自由以下组成的组的一种或多种标记物：阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、SSEA-3、肿瘤排斥抗原1-81(Tra-1-81)、Tra-1-60、八聚体结合转录因子-4(Oct-4)、性别决定区Y-box-2(Sox-2)、nanog、锌指蛋白-42(Rex-1/Zfp-42)、leftyA、畸胎癌衍生生长因子(Tdgf)和端粒重复序列结合因子(Terf-1)。

25.如权利要求15所述的方法，其中所述多潜能细胞能够分化成衍生自内胚层、中胚层和外胚层的细胞。