[发明专利]微载体灌注培养方法及其用途

权利要求书

1.一种培养哺乳动物细胞的方法，所述方法包括：

提供摇瓶，其含有置于第一液体培养基中的哺乳动物细胞，其中所述第一液体培养基占据约20％至约30％的摇瓶容积并含有浓度为约1.0g/L至约15.0g/L的多个微载体；

在约32℃至约39℃并伴随约85转每分钟(RPM)至约125RPM的旋转搅拌将所述摇瓶温育一段时间；和

在所述一段时间的最初48-96小时后，连续地或周期性地去除第一体积的第一液体培养基并向所述第一液体培养基添加第二体积的第二液体培养基，其中所述第一和第二体积大致相等。

2.权利要求1的方法，其中所述第一体积的第一液体培养基是基本不含微载体的。

3.权利要求1的方法，其中所述第一液体培养基占据约25％至约30％的摇瓶容积。

4.权利要求1的方法，其中在所述一段时间的开始时，所述第一液体培养基含有0.1x10⁶细胞/mL-0.5x10⁶细胞/mL。

5.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

6.权利要求5的方法，其中所述CHO细胞含有编码重组蛋白的核酸。

7.权利要求5的方法，其中所述重组蛋白是免疫球蛋白、酶、生长因子、蛋白片段或工程化蛋白。

8.权利要求1的方法，其中所述去除第一体积的第一液体培养基和添加第二体积的第二液体培养基是同时进行的。

9.权利要求1的方法，其中所述去除第一体积的第一液体培养基和添加第二体积的第二液体培养基是连续进行的。

10.权利要求1的方法，其中所述去除第一体积的第一液体培养基和添加第二体积的第二液体培养基是周期性地进行的。

11.权利要求1的方法，其中去除的第一液体培养基的第一体积和添加的第二液体培养基的第二体积是随时间增加的。

12.权利要求1的方法，其中所述第一液体培养基与第二液体培养基相同。

13.权利要求1的方法，其中所述第一液体培养基与第二液体培养基不同。

14.权利要求1的方法，其中所述摇瓶是透气性的且容积为约20mL至约1L。

15.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物细胞悬浮于约40mL至约80mL的第一液体培养基中。

16.权利要求1的方法，其中所述第一液体培养基和/或第二液体培养基选自下组：化学成分确定的液体培养基、无血清液体培养基、含血清液体培养基、无动物来源组分的液体培养基和无蛋白质的培养基。

17.权利要求1的方法，其中在所述一段时间的最初48-96小时后，在每个24小时的时段中，去除的第一液体培养基的第一体积和添加的第二液体培养基的第二体积为第一液体培养基的体积的约30％至约95％。

18.权利要求1的方法，其中在去除第一体积的第一液体培养基之前中止搅拌至少30秒的一段时间。

19.权利要求1的方法，其中所述多个微载体的平均直径为约150μm至约800μm。

20.权利要求19的方法，其中所述多个微载体含有一个或多个孔。

21.权利要求20的方法，其中所述一个或多个孔的平均直径为约25μm至约35μm。

22.权利要求1的方法，其中所述摇瓶以相对于台面或水平约45度的角度进行温育。