[发明专利]用于产生和递送RNA的组合物和方法

权利要求书

1.一种工程化表达构建体，其包含：

a.启动子；

b.位于所述启动子的转录下游的第一核酸序列，其中所述第一核酸序列编码dsRNA或蛋白质；和

c.位于所述第一核酸序列的3’的第二核酸序列，其中所述第二核酸序列从5’至3’包含含有SEQ ID NO：9的第一转录终止子、含有SEQ ID NO：5的第二转录终止子、含有SEQ IDNO：6的第三转录终止子和含有SEQ ID NO：5的第四转录终止子；

其中所述第一、第二、第三和第四转录终止子形成包含至少三个相邻中等大小的发夹的二级结构，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列可操作地连接于所述启动子，且其中所述启动子和转录终止子序列是功能性组合。

2.根据权利要求1所述的工程化表达构建体，其中所述发夹间隔包含10个或更少的核苷酸的间隔区。

3.根据权利要求1或2所述的工程化表达构建体，其中所述第二核酸序列包含SEQ IDNO:18。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的工程化表达构建体，其中所述启动子是噬菌体启动子。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的工程化表达构建体，其中所述启动子选自由以下组成的组：T7、T3、SV40、SP6、T5、β-内酰胺酶启动子、大肠埃希氏菌半乳糖启动子、阿拉伯糖启动子、碱性磷酸酶启动子、色氨酸(trp)启动子、乳糖操纵子(lac)启动子、lacUV5启动子、trc启动子和tac启动子。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的工程化表达构建体，其中所述第一核酸序列选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、4、14、15和20。

7.一种提高RNA产量的方法，其包括向宿主细胞提供权利要求1-3中任一项的工程化表达构建体。

8.根据权利要求7所述的提高RNA产量的方法，其中所述宿主细胞是大肠埃希氏菌HT115(DE3)细胞。

9.一种提高蛋白质产量的方法，其包括向宿主细胞提供工程化表达构建体，其中所述工程化表达构建体包含：

a.启动子；

b.位于所述启动子的转录下游的第一核酸序列，其中所述第一核酸序列编码蛋白质；和

c.位于所述第一核酸序列的3’的第二核酸序列，其中所述第二核酸序列从5’至3’包含含有SEQ ID NO：9的第一转录终止子、含有SEQ ID NO：5的第二转录终止子、含有SEQ IDNO：6的第三转录终止子和含有SEQ ID NO：5的第四转录终止子；

其中所述第一、第二、第三和第四转录终止子形成包含至少三个相邻中等大小的发夹的二级结构，其中所述第一核酸序列和第二核酸序列可操作地连接于所述启动子，且其中所述启动子和转录终止子序列是功能性组合。

10.根据权利要求9所述的提高蛋白质产量的方法，其中所述宿主细胞是BL21(DE3)细胞。

11.一种载体，其包含权利要求1-3中任一项的工程化表达构建体，其中所述载体是质粒载体。

12.一种细菌宿主细胞，其包含权利要求11的载体。

13.根据权利要求12所述的细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞不表达RNA酶A。

14.根据权利要求12所述的细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞是大肠埃希氏菌细胞。