[发明专利]磁性免疫数字PCR试验

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2013年5月9日提交的美国临时专利申请61/821,530和2013年6月20日提交的美国临时专利申请61/837,533的优先权，通过引用将其全部内容纳入本文用于所有目的。

背景技术

样品中抗原的定量可为多种临床应用提供有用的信息。一种检测和定量抗原的方法是通过酶联免疫吸附实验(ELISA)。然而，该试验可实现的检测限和定量精确性无法满足多种应用。

因此，仍需要提供改进的定量精确性和低末端灵敏度的检测和定量抗原的方法。

发明内容

在一个方面，提供检测样品中抗原的方法。在一些实施方式中，该方法包括：

将所述样品与第一亲和试剂和第二亲和试剂接触，其中所述第二亲和试剂连接磁珠，并且若存在抗原则所述第一和第二亲和试剂特异性结合所述抗原；

将含所述第一和第二亲和试剂的样品与第三亲和试剂接触，其中所述第三亲和试剂含标记物并且所述第三亲和试剂特异性结合所述第一亲和试剂，从而形成抗原-亲和试剂-标记物复合物；

根据是否存在所述磁珠，从含所述抗原-亲和试剂-标记物复合物的样品中分离所述抗原-亲和试剂-标记物复合物和未复合组分，从而生成含所述抗原-亲和试剂-标记物复合物的分离样品；

至少将来自所述分离样品的标记物划分为多种分区；和

检测至少一个分区中是否存在标记物；从而检测是否存在抗原。

在一些实施方式中，该方法包括：

将所述样品与第一亲和试剂和第二亲和试剂接触，其中所述第一亲和试剂包含标记物，所述第二亲和试剂连接磁珠，并且若存在抗原则所述第一和第二亲和试剂特异性结合所述抗原，从而形成抗原-亲和试剂-标记物复合物；

根据是否存在所述磁珠，从含所述抗原-亲和试剂-标记物复合物的样品中分离所述抗原-亲和试剂-标记物复合物和未复合组分，从而生成含所述抗原-亲和试剂-标记物复合物的分离样品；

至少将来自所述分离样品的标记物划分为多种分区；和

检测至少一个分区中是否存在标记物；从而检测是否存在抗原。

在一些实施方式中，经划分的标记物在抗原-亲和试剂-标记物复合物中。在一些实施方式中，在所述划分步骤前将所述标记物从所述抗原-亲和试剂-标记物复合物中切下。

在一些实施方式中，在所述分离步骤之后和所述划分步骤之前，所述方法还包括在溶液中至少重悬来自所述分离样品的标记物。·

在另一方面，提供检测样品中抗体分析物的方法，其中所述抗体分析物特异性结合具体抗原。在一些实施方式中，该方法包括：

将样品与抗原和第一亲和试剂接触，其中所述第一亲和试剂连接磁珠并特异性结合所述抗原，从而形成分析物-抗原-亲和试剂复合物；

将含所述分析物-抗原-亲和试剂复合物的样品与第二亲和试剂接触，其中所述第二亲和试剂包含标记物并特异性结合所述抗体分析物，从而形成分析物-抗原-亲和试剂-标记物复合物；

根据是否存在所述磁珠，从所述样品中分离所述分析物-抗原-亲和试剂-标记物复合物和未复合组分，从而生成含所述分析物-抗原-亲和试剂-标记物复合物的分离样品；

至少将来自所述分离样品的标记物划分为多种分区；和

检测至少一个分区中是否存在标记物；从而检测是否存在抗体分析物。

在一些实施方式种，经划分的标记物在分析物-抗原-亲和试剂-标记物复合物中。在一些实施方式中，在所述划分步骤前将所述标记物从所述分析物-抗原-亲和试剂-标记物复合物中切下。

在一些实施方式中，所述第一、第二和/或第三亲和试剂各选自：抗体、适体、和非抗体蛋白支架。在一些实施方式中，所述第一、第二和/或第三亲和试剂各为抗体。

在一些实施方式中，该标记物是核酸标记物。在一些实施方式中，所述核酸标记物包含可检测标签。在一些实施方式中，所述可检测标签是荧光团。在一些实施方式中，所述可检测标签是插入染料。

在一些实施方式中，在所述检测步骤前扩增所述核酸标记物。在一些实施方式中，所述核酸标记物在存在探针的情况下扩增，所述探针包含荧光团和淬灭剂，所述核酸标记物的扩增生成来自所述探针的荧光信号。在一些实施方式中，所述溶液包含用于核酸扩增的试剂。在一些实施方式中，在所述检测步骤前未扩增所述核酸标记物。