[发明专利]用于直接对全血样品测量分析物的血浆浓度的方法

说明书

一种测量全血样品中分析物的量的方法包括：‑测量所述全血样品的血球容量计水平；‑测量直接在所述全血样品中的分析物的量；以及‑根据以下关系，计算矫正的分析物的量：D_P＝P_a(D_ST，D_H)，其中，P_a是所述矫正的分析物的量，D_ST是所测量的分析物的量，D_H是所测量的血球容量计水平，以及P_a是具有次数大于或等于1的非常数多项式，所述非常数多项式的不确定的值是所述测量的分析物的量D_ST和所述测量的血球容量计水平D_H，以及所述非常数多项式的多项式系数依赖于所述分析物。

技术领域

本发明涉及生物样品分析，以及更具体地涉及血液样品中分析物的浓度或量的测量。本发明特别地发现ELISA、ELFA、或免疫捕获类型的免疫分析技术测量中的应用。

背景技术

通常，对感兴趣的分析物和对可能包含所述感兴趣的分析物的全血样品中其浓度的研究包括，第一，从红细胞分离血浆，特别地，通过离心法，以及然后测量血浆中的分析物浓度。

“全血”对应于包括具有所有其组分以及因而特别地血浆和红细胞的血液的生物样品。它可以例如是没有任何变换的从人或动物采样的血液，或已被添加辅药(例如，抗凝血剂)的相同血液。

在浓度测量方法之中，已知包括根据血液样品中分析物的数量来修改可测量的性质(例如，光学的、电的、化学的、PH或酶性质)的技术，特别地，所谓直接的、间接的和竞争的ELISA(“酶联免疫吸附法”)、ELFA(“酶联荧光测定”)和免疫捕获技术。

图1示意地图示直接的ELISA测量的主要步骤，也称为“夹心(sandwich)”ELISA，因为它涉及用于结合分析物的两个搭档，其中，例如分析物是抗原以及两个结合搭档是抗体，每个包括彼此不同的位或表位，以及每个能够结合到提供有补充位的所述抗原。ELISA测量包括，在它的最简单版本中：

■例如用分析物的第一结合搭档的层来涂载体的表面(例如，井)，该分析物期望被检测或其浓度期望被测量，其中第一结合搭档展现对分析物补充的位(图1A)；

■将血液样品(例如，源自全血样品的离心的血浆)注到井中(图1B)，以便存在于血浆中的分析物与固定到井壁的第一结合搭档配合(图1C)；

■执行井的第一次冲洗以去除正在进行的分析的不感兴趣的成分，例如未被研究的抗体和抗原(图1D)；

■将分析物的第二结合搭档注到井中，每个提供有(i)对用第一结合搭档固定的分析物的自由位中的一个补充的以及与第一结合搭档的补充位不同的位，以及(ii)具有能够催化基质水解的酶功能的组分，该基质根据催化的氢的数量来改变颜色(图1E)。包含酶功能的这样的第二结合搭档称为“配对”。

■执行井的第二次冲洗以去除过量的配对(图1F)；

■将通过配对的酶功能可降解的基质添加到井中以及通过光谱测定法来测量井中包含的介质的色度或光学密度(图1G)。

因为色度直接依赖于通过固定到载体的壁的第一结合搭档固定的分析物的数量或量，所以该光学性质的测量是存在于血浆样品中的分析物的总的数量的间接测量，以及因而其中分析物浓度的间接测量(已知样品的体积)。然后，用预定的数学模型，将测量的色度变换成量和/或浓度值。“量”因而意指样品中分析物的数量。“浓度”意指量除以对其执行测量的样品的体积。

“竞争”ELISA涉及分析物的单个结合搭档以及与要分析的分析物竞争的化合物，该单个结合搭档展现对分析物的位中的一个补充的位。这两个成分中的一个然后具有能够催化基质水解的酶功能，该基质根据催化的氢的数量来改变颜色。量以及因而浓度因此与读色度成反比。

除了由酶功能催化的基质生成例如由荧光计测量的荧光的事实外，ELFA测量类似于ELISA测量。