[发明专利]人广泛自我更新型成红细胞(ESRE)

权利要求书

1.一种在培养中增殖并且保持最终成熟的能力的人广泛自我更新型成红细胞(ESRE)分离群，其中所述ESRE未永生化，能够经历至少30次细胞分裂且源自定形红系祖细胞群，进一步地其中所述ESRE群与经历限制性自我更新的成红细胞和原代原成红细胞相比表现出更高的Bmi-1表达水平。

2.根据权利要求1所述的ESRE分离群，其中所述ESRE经遗传修饰以表达一种或多种治疗性蛋白。

3.根据权利要求1所述的ESRE分离群，其中所述ESRE经遗传修饰以表达选自因子IX、因子VIIIc、温韦伯氏因子、组织型纤溶酶原活化物、蛋白C、蛋白S、抗凝血酶III及其任何组合的因子。

4.根据权利要求1所述的ESRE分离群，其中所述ESRE经遗传修饰以过表达Bmi-1蛋白。

5.一种组合物，其包含：

权利要求1-4中任一项限定的人ESRE分离群和

包含Epo、SCF、地塞米松和脂质混合物的扩增培养基。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述扩增培养基还包含Bmi-1蛋白、Bmi-1肽和Bmi-1调节剂中的一种或多种。

7.一种由人细胞生成基本上纯的广泛自我更新型成红细胞(ESRE)群的方法，其中所述人细胞选自胚胎干细胞、诱导多能干(iPS)细胞、成体干细胞、脐血细胞、骨髓细胞及其组合，所述胚胎干细胞不包括使用人胚胎获得的细胞，所述方法包括：

a)在促进定形红系祖细胞群生成的条件下培养人细胞，

b)使所述定形红系祖细胞群在包含Epo、SCF、地塞米松和脂质混合物的扩增培养基中扩增，按足以调节红系细胞自我更新的量向所述定形红系祖细胞群提供Bmi-1蛋白、Bmi-1肽和Bmi-1调节剂中的一种或多种，从而生成基本上纯的ESRE群。

8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤a)中的所述定形红系祖细胞群源自类胚体(EB)。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述细胞在步骤a)中培养至少约20天。

10.根据权利要求7所述的方法，其中在步骤b)中，所述ESRE群连续经历自我更新细胞分裂至少约45天。

11.根据权利要求7所述的方法，其中所述Bmi-1调节剂为刺猬因子配体。

12.根据权利要求7所述的方法，其中所述扩增培养基为补充了约2U/mL Epo、约100ng/mL人重组SCF、约10^-6M地塞米松、约40ng/mL人重组胰岛素样生长因子-1和约0.4％脂质混合物的无动物组分培养基。

13.基因递送媒介物在制备用于向哺乳动物递送基因的药剂中的用途，其中所述媒介物包含权利要求2所述的经遗传修饰的ESRE。

14.一种生成人红血细胞(RBC)的方法，所述方法包括在包含EPO和胰岛素的分化培养基中培养权利要求1-4中任一项所述的广泛自我更新型成红细胞(ESRE)。

15.治疗有效量的权利要求1-4中任一项所限定的人ESRE分离群在制备用于治疗患有血液病的受试者的药剂中的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述ESRE经遗传修饰以表达一种或多种因子以便治疗患有所述血液病的所述受试者。

17.根据权利要求16所述的用途，其中所述血液病为血友病。

18.根据权利要求16所述的用途，其中所述因子选自因子VIII或因子VIIIa、因子V、因子Va、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、温韦伯氏因子、组织型纤溶酶原活化物、蛋白C、蛋白S、抗凝血酶III及其任何组合。