[发明专利]使用蛋白质溶液治疗胶原蛋白缺损的方法

权利要求书

1.用于在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞产生的方法，包括将包含选自IL-1ra、sTNF-R1、sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1和sIL-1RII的至少两种蛋白质的组合物施用到所述位置，其中各蛋白质在所述组合物中的浓度大于所述蛋白质在正常血液中的浓度。

2.权利要求1的方法，其中所述来源于血液的组合物是所述对象自体的。

3.权利要求1的方法，其中所述来源于血液的组合物包含

(a)至少约10,000pg/ml的IL1-ra；

(b)至少约1,200pg/ml的sTNF-RI；和

(c)蛋白质，选自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物，其中所述蛋白质的浓度高于正常血液中所述蛋白质的基线浓度。

4.用于在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞产生的方法，包括将来源于血液的组合物施用到所述位置，所述组合物包含

(a)白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)，浓度是正常血液中的IL-1ra浓度的至少3倍；

(b)可溶性组织坏死因子-r1(sTNF-r1)，浓度是正常血液中的IL-1ra浓度的至少2倍；

(c)细胞因子生成细胞，浓度是正常血液中的细胞因子生成细胞浓度的至少2倍；和

(d)血小板，浓度是正常血液中的血小板浓度的至少2倍。

5.权利要求4的方法，其中IL-1ra的浓度为约10,000pg/ml-约50,000pg/ml。

6.权利要求4的方法，其中TNF-r1的浓度为约1,200pg/ml-约4,000pg/ml。

7.权利要求6的方法，其中sTNF-r1的浓度为约2000pg/ml或更高。

8.权利要求4的方法，其中所述组合物进一步包含选自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-β1、sIL-1RII及其混合物的蛋白质，其中所述蛋白质在所述组合物中的浓度大于所述蛋白质在正常血液中的浓度。

9.权利要求4的方法，其中所述组合物进一步包含浓缩的骨髓抽吸物。

10.用于在哺乳动物对象中的胶原蛋白缺损位置刺激软骨细胞产生的方法，包括：

a)从所述对象获得细胞因子细胞悬液；

(b)分级分离所述液体以产生包含白介素-1受体拮抗剂的自体的蛋白质溶液；

(c)将所述自体的蛋白质溶液施用到所述对象中的缺损位置。

11.权利要求10的方法，其中所述细胞因子细胞悬液包含全血、骨髓抽吸物、脂肪组织、尿液、其部分和其混合物。

12.权利要求11的方法，其中所述液体是富血小板血浆。

13.权利要求12的方法，其中所述分级分离包括将血液置于容器，可操作以将所述血液分离为两或多个部分的分离器；以及离心所述分离器以产生富血小板血浆部分。

14.权利要求13的方法，其中所述分级分离进一步包括将所述富血小板血浆与聚丙烯酰胺珠接触，并将所述富血小板血浆与所述聚丙烯酰胺珠分离以形成所述自体的蛋白质溶液。

15.权利要求10的方法，其中所述分级分离包括：

(1)将包含全血、骨髓抽吸物或两者的组织和抗凝剂加样到置有浮标的管内，其中所述浮标的密度使得浮标能在管内组织离心后达到平衡位置，所述平衡位置在包含细胞因子生成细胞的第一部分和第二部分之间，第二部分的细胞因子生成细胞浓度大于第一部分的细胞因子生成细胞浓度；

(2)对管进行离心，从而所述浮标界定第一部分与第二部分之间的界面；和

(3)收集第二部分；

(4)将所述第二部分加样到包含固相提取材料的浓缩器组件，温育与固相提取材料接触的第二部分；和

(5)旋转浓缩器组件，采用的离心速度能分离固相提取材料和富含白介素-1受体拮抗剂的溶液，所述溶液的白介素-1受体拮抗剂浓度大于全血。