[发明专利]用于高通量纯化的方法和设备

权利要求书

1.一种在包含血小板的样品中纯化具有至少预定大小的第一颗粒的方法，所述方法包括：

(a)将至少100mL的样品施加至设备，所述样品包含具有至少所述预定大小的第一颗粒以及小于所述预定大小的第二颗粒，其中所述第一颗粒是来自所述样品的白细胞或干细胞并且所述第二颗粒包括来自所述样品的血小板，并且所述样品还包含：

(i)钙螯合剂；和

(ii)凝血酶抑制剂；以及

(b)使至少100mL的所述样品以至少1mL/min的速率流过所述设备，其中所述设备包括布置成行的障碍物阵列，每个后续行的障碍物相对于前一行横向偏移，其中所述障碍物区别地使具有至少所述预定大小的所述第一颗粒偏转至第一出口而使第二颗粒偏转至第二出口，从而纯化具有至少所述预定大小的所述第一颗粒；并且

其中相对于来自缺少所述钙螯合剂和所述凝血酶抑制剂的样品的、被捕获在所述设备中的颗粒的数目，来自包含所述钙螯合剂和所述凝血酶抑制剂的样品的更少的颗粒被捕获在所述设备中。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述样品是血液样品。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述血液样品包括脐带血样品,并且其中所述血液样品以至少4cm/sec的速度通过所述设备。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述血液样品包括胎盘脐带血样品，并且其中所述血液样品以至少4cm/sec的速度通过所述设备。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述钙螯合剂以至少5mM的浓度存在并且所述凝血酶抑制剂以至少40μM的浓度存在。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述钙螯合剂以至少5mM的浓度存在并且所述凝血酶抑制剂以20-60μM的浓度存在。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述钙螯合剂以2mM至7mM的浓度存在并且所述凝血酶抑制剂以20μM至60μM的浓度存在。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述第一颗粒是白细胞，所述白细胞包括CD34+细胞。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述第一颗粒是干细胞。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述干细胞是外周血干细胞(PBSC)。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述干细胞是造血干细胞(HSC)。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述HSC包括CD34+/CD45+HSC。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述第二颗粒包括红细胞。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中纯化的具有至少所述预定大小的第一颗粒为至少90％纯度。

15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中纯化的具有至少所述预定大小的第一颗粒占所述样品中的所述第一颗粒的至少90％。

16.如权利要求8-15中任一项所述的方法，其中所述纯化的细胞的至少90％是活的。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述样品还包括细胞毒性T细胞、抗原特异性T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、调节性B细胞或调节性巨噬细胞。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述样品还包括自然杀伤T细胞。

19.如权利要求1所述的方法，其中所述第二颗粒还包括红细胞。