[发明专利]自体纤维蛋白的临时制备

说明书

技术领域

本发明总体涉及包括纤维蛋白原和凝血酶的组织和细胞的制备。更具体地讲，本发明涉及被设计用于分离血液或血浆蛋白组分的系统及装置，以及它们的用途，具体地涉及从单个血液捐献者分离和浓缩富含纤维蛋白原和凝血酶的血浆级分，并且涉及它们随后的组合以出于组织和细胞工程目的提供例如自体纤维蛋白胶或纤维蛋白凝胶或者作为3D纤维基质。

背景技术

处于纤维蛋白胶和密封胶形式的组织粘合剂已被提出用于在多种外伤和手术情况下控制出血、密封伤口边缘并且促进伤口愈合。此外，纤维蛋白密封胶可用于充当生物基质以有利于和提高细胞生存期、细胞分化和细胞增殖，重点在于生长因子和干细胞。纤维蛋白胶和纤维蛋白凝胶包含纤维蛋白原和凝血酶，该纤维蛋白原和凝血酶，当混合在一起时，形成纤维的固化纤维蛋白网，即用于止血和凝血的强度的基本物质。纤维蛋白可内部操作地用于影响止血、伤口边缘的密封或者用作粘附性预防屏障。

在欧洲和其他地方，商业的纤维蛋白胶从纤维蛋白原和凝血酶制备，所述纤维蛋白原和凝血酶从来自多个人类捐献者或从动物来源(例如，牛)的混合血浆冷沉物获得。这些产品是利用实验室药物监管制造工艺进行制备，该工艺包括需要巴氏杀菌和过滤以便消除可从这些源转移到患者的有害病原体。

这些技术的已被证实的另外风险是源于与此类混合血浆源相关联的组成部分的免疫反应的风险。另外，该技术的复杂性在于冷藏管理、冗长的围术期处理时间和成本(尤其是在更高容量方面)。这些原因使得这些产品需要谨慎使用或者完全撤销。

为了避免与混合血浆源相关联的风险，已经提出使用在纤维蛋白原和凝血酶从单个捐献者获得的情况下的自体纤维蛋白胶、密封胶或凝胶。这些纤维蛋白产品中的一些，然而，必须依赖于自体纤维蛋白原与例如牛凝血酶的组合，并且因此仍遭受与非人类产品相关联的风险或缺陷，例如针对牛血浆蛋白的免疫反应。

出于这些原因，在纤维蛋白原和凝血酶组分从单个人类捐献者血液或血浆样品分离并且用在相同捐献者身上的情况下，已经提出了改进的纤维蛋白产品及其制备方法。

还已经相继提出了若干系统、工具或装置、以及方法，并且至少提出了相同情况中的一些，随后启动以便满足这种尚未被满足的临床需求。

EP0877632B1，例如，涉及用于逐步制备手术所用的自体纤维蛋白胶的方法，该方法包括血液样品的离心分离以提供主要由血浆组成的包含纤维蛋白原的上清液，借助于离心分离和随后的过滤来浓缩血浆级分中的纤维蛋白原，并且在使用前最终冷冻所浓缩的血浆。通过使解冻的浓缩的血浆级分与适当的引子(事实上是凝血酶)混合来获得纤维蛋白胶。使用构成闭合系统的连通的塑料小袋执行离心分离，并且事实上手动执行特定血浆级分的转移。

EP1155706A1披露了用于制备“高浓缩的临床备好的纤维蛋白原”的设备并且披露了闭合系统，其实是具有用于容纳来自患者血液浓度的构件、从不希望的组分提取和分离血浆的质膜分离器、提供纤维蛋白原分离的第二质膜分离器的设备。

真空泵连接到纤维蛋白原收集器；冷冻机用于为多种血浆级分提供可调温度；通讯构件包括至少一个蠕动泵以维持该闭合系统内的血浆运输。根据特定实施例，该系统还包括混合器以用于使纤维蛋白原与适当浓度的自体凝血酶和钙盐混合以形成纤维蛋白胶。

EP1420833涉及用于制备自体血小板凝胶的系统(设备)，该系统将自体抗凝血液样品用作起始材料，并且包括(在其他中)第一容器，该第一容器包括用于激活血液组分的构件，其然后提供凝固的血液成分并且最终由此表达凝血酶。

所述第一血管装配有外部过滤器，该外部过滤器具有允许凝血酶选择性通过的孔尺寸，该过滤的凝血酶然后与自体血液组分的单独部分进行混合以形成自体血小板凝胶，该自体血液组分如红细胞、包细胞、富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)，所有这些成分得自初始的自体血液样品的离心分离并且被储存于第二容器中。

所有这些溶液及其等效物存在一些缺点：最简单的系统，例如EP0877632B1中限定的系统，存在如下风险，即干扰无菌情况(手动操作所固有的)，不能产生满足大手术所需的足够数量，手术期间操作不切实际，在手术前劳动输入和材料两方面耗费过大，并且花费时间过长从而不允许此类系统在手术期间的使用。