[发明专利]经工程化以克服内涵体截留的人工转录因子

权利要求书

1.一种人工转录因子，其包含融合至激活性或抑制性蛋白结构域、特异性靶向基因启动子的多指锌指蛋白，核定位序列，蛋白转导结构域和内涵体特异性蛋白酶识别位点。

2.根据权利要求1所述的人工转录因子，其中，所述基因启动子是受体基因的启动子。

3.根据权利要求1或2所述的人工转录因子，其中，所述基因启动子是核受体基因的启动子。

4.根据权利要求1所述的人工转录因子，其中，所述基因启动子是单倍剂量不足基因的启动子。

5.根据权利要求1至4中的任一项所述的人工转录因子，其中，所述内涵体特异性蛋白酶识别位点是组织蛋白酶切割位点。

6.根据权利要求5所述的人工转录因子，其中，所述内涵体特异性蛋白酶识别位点是组织蛋白酶B切割位点。

7.根据权利要求6所述的人工转录因子，其中，所述内涵体特异性蛋白酶识别位点是组织蛋白酶B切割位点SEQIDNO：28。

8.根据权利要求1所述的人工转录因子，其包含蛋白序列选自SEQIDNO：64至89，144至147，156至161，174至177，188，191至193，200至205，218至220和227至244的锌指蛋白。

9.根据权利要求1所述的人工转录因子，其包含蛋白序列选自SEQIDNO：64至89，144至147，156至161，174至177，188，191至193，200至205，218至220，和227至244的锌指蛋白，其中多至三个独立的锌指模块被具有替代的结合特性的其他锌指模块更换和/或其中多至十二个单独的氨基酸被更换。

10.根据权利要求1至9中的任一项所述的人工转录因子，其中，所述激活性或抑制性蛋白结构域选自VP16，VP64，CJ7，p65-TA1，SAD，NF-1，AP-2，SP1-A，SP1-B，Oct-1，Oct-2，Oct2-5x，MTF-1，BTEB-2，LKLF，N-KRAB，C-KRAB，SID和ERD。

11.根据权利要求1至10中的任一项所述的人工转录因子，其中，所述核定位序列是碱性氨基酸簇，其含有赖氨酸残基，接着是赖氨酸或精氨酸残基，接着是任何氨基酸，接着是赖氨酸或精氨酸残基，或SEQIDNO：37的SV40NLS。

12.根据权利要求1至11中的任一项所述的人工转录因子，其中，所述蛋白转导结构域选自SEQIDNO：20的HIV衍生的TAT肽，SEQIDNO：21的mT02，SEQIDNO：22的mT03，SEQIDNO：23的R9和SEQIDNO：24的ANTP。

13.根据权利要求1至12中的任一项所述的人工转录因子，其通过内涵体蛋白酶敏感的接头连接于SEQIDNO：25至27的融合肽。

14.根据权利要求1至13中的任一项所述的人工转录因子，其还包括聚乙二醇残基。

15.根据权利要求1至14中的任一项所述的人工转录因子，所述人工转录因子用于增加或减少由基因启动子驱动的表达。

16.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至14中的任一项所述的人工转录因子。

17.一种大肠杆菌宿主细胞，其含有SEQIDNO：289至319的表达构建体，且用于生产权利要求1至13中的任一项所述的人工转录因子。

18.根据权利要求1至14中的任一项所述的人工转录因子，所述人工转录因子用于治疗疾病，所述疾病中，基因表达的调制是治疗上有益的。

19.一种治疗疾病的方法，所述疾病中，基因表达的调制是治疗上有益的，该方法包括对需要其的患者施用治疗有效量的权利要求1至14中的任一项所述的人工转录因子。