[发明专利]以干燥状态包被有层粘连蛋白片段的细胞培养器具

说明书

一种细胞培养器具，在要与细胞接触的表面上以干燥状态包被有具有整合素α6β1结合活性的层粘连蛋白片段或其改造体，该细胞培养器具的特征在于，该层粘连蛋白片段为选自层粘连蛋白α5β1γ1和层粘连蛋白α5β2γ1中的至少1种。

技术领域

本发明涉及细胞培养器具，详细而言涉及以干燥状态包被有具有整合素α6β1结合活性的层粘连蛋白片段或其改造体的细胞培养器具。背景技术

人ES细胞、人iPS细胞等人多能干细胞在再生医疗中的应用受到全世界的注目。为了将人多能干细胞应用于再生医疗，需要开发出将这些干细胞安全且稳定地进行培养、扩增的培养技术。特别是在不使用饲养细胞、且不含有来自异种动物的成分的(无异源体系)条件下的稳定培养法的开发成为了迫切的课题。

本发明人着眼于初期胚胎的多能干细胞将以层粘连蛋白α5β1γ1(层粘连蛋白511)为主要成分的基底膜作为基点，并在世界上领先地报道了人层粘连蛋白511的重组蛋白质作为人ES细胞的无饲养层培养基质有用(参照非专利文献1)。另外，本发明人报道了，层粘连蛋白511对α6β1整合素具有非常高的亲和性、以及层粘连蛋白511的E8片段(层粘连蛋白511E8)具有与全长的层粘连蛋白511同等的α6β1整合素结合活性(参照非专利文献2)。另外，本发明人发现，以往较困难的多能干细胞的基于单一分散的传代培养能够在层粘连蛋白511E8上实现，并报道了人层粘连蛋白511E8作为人多能干细胞的无饲养层培养基质极其有效(参照专利文献1、非专利文献3)。

以人层粘连蛋白511E8为基质来培养细胞时，需要在培养器的表面预先包被人层粘连蛋白511E8。在要培养人多能干细胞时，以如下的方式进行包被：以达到0.25～2.0μg/cm²的方式在培养器中加入人层粘连蛋白511E8溶液，在4℃孵育过夜、或在室温～37℃孵育1～3小时。但是，包被在培养器表面的层粘连蛋白或其活性片段容易由于干燥而失活(参照非专利文献4)，实际中，本发明人确认到，包被于培养器表面的人层粘连蛋白511E8在干燥后会逐渐失去活性。为了将人层粘连蛋白511E8作为人多能干细胞的培养基质而广泛地在再生医疗等领域使用，正在寻求用于以干燥状态长期稳定地维持包被在培养器表面的人层粘连蛋白511E8的活性的技术开发。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开公报第2011/043405号

非专利文献

非专利文献1：Miyazaki T,Futaki S,Hasegawa K,Kawasaki M,Sanzen N,Hayashi M,Kawase E,Sekiguchi K,Nakatsuji N,Suemori H.Recombinant humanlaminin isoforms can support the undifferentiated growth of human embryonicstem cells.Biochem.Biophys.Res.Commun.375:27-35,2008.

非专利文献2：Taniguchi Y,Ido H,Sanzen N,Hayashi M,Sato-Nishiuchi R,Futaki S,Sekiguchi K.The C-terminal region of laminin beta chains modulatesthe integrin binding affinities of laminins.J Biol Chem.284:7820-7831,2009.