[发明专利]含有海藻糖及葡聚糖的哺乳动物细胞移植用溶液

说明书

本发明的课题在于提供细胞移植用溶液和使用所述细胞移植用溶液长期保存哺乳动物细胞的方法，所述细胞移植用溶液能够有效地抑制保存哺乳动物细胞时的细胞死亡。本发明的特征在于，在含有2.0～6.0(w/v)％的海藻糖或其衍生物或它们的盐(海藻糖类)、和4.0～7.0(w/v)％的葡聚糖或其衍生物或它们的盐(葡聚糖类)的细胞移植用生理性水溶液中保存哺乳动物细胞。通过细胞移植用生理性水溶液中含有的海藻糖类和葡聚糖类的效果，能够抑制长期(至少14天)保存哺乳动物细胞时的细胞存活率的降低。作为上述生理性水溶液，优选选自由乳酸林格液、生理盐水、林格液及乙酸林格液组成的组，可以特别合适地举出乳酸林格液或生理盐水。

技术领域

本发明涉及：在含有2.0～6.0(w/v)％的海藻糖或其衍生物或它们的盐(以下有时称为“海藻糖类”)、和4.0～7.0(w/v)％的葡聚糖或其衍生物或它们的盐(以下有时称为“葡聚糖类”)的细胞移植用生理性水溶液(以下有时称为“本申请的细胞移植用溶液”)中保存哺乳动物细胞的方法；本申请的移植用溶液；和含有移植用细胞的生理性水溶液，其含有哺乳动物细胞、和海藻糖类及葡聚糖类。

背景技术

近年来，由于干细胞研究的迅速发展，向再生医疗中应用的形势高涨，其知识和理解不仅在研究者中、在普通人中也得到了广泛普及。使用干细胞的再生医疗是以利用干细胞所具有的自复制能力和多分化能力、干细胞分泌的因子来恢复因各种疾病而受到损伤的细胞和组织的功能为目的的医疗。若对白血病、再生不良性贫血等血液疑难病患者进行骨髓移植，造血干细胞在患者体内成活，在几乎一生内维持造血能力成为可能。此外，近来很多研究者以使用除造血干细胞以外的干细胞的临床应用为目标，对中枢神经、末梢神经、骨髓、小肠等中的干细胞进行鉴定，已开始实践针对外伤性疾病和组织变性疾病进行组织干细胞移植治疗(非专利文献1～3)。另一方面，癌症免疫细胞疗法是将具有攻击癌症的功能的免疫细胞取出至体外、强化其功能后再次移植回体内的最先进的细胞医疗，并已实践了树突状细胞疫苗疗法、αβT细胞疗法、γδT细胞疗法、CTL疗法、自然杀伤细胞疗法(NK细胞疗法)等利用T细胞的疗法。

在长期保存用于移植治疗中的干细胞、T细胞时，通过在液体中的保存，无法良好地维持细胞存活率。例如，已有报道称将人骨髓干细胞在生理盐水中冷藏保存(4℃)时，细胞存活率在48小时后降低至40％以下，在72小时后降低至20％以下(非专利文献4)。因此，长期保存移植用干细胞、移植用T细胞时，一般进行冷冻保存。但是，由于在冷冻保存液中通常添加有DMSO、甘油等冷冻保存剂，因此，将经冷冻保存的干细胞、T细胞解冻之后，需要在进行移植治疗之前除去移植冷冻保存剂，存在耗费劳力的问题。另外，即使在冷冻保存液中添加冷冻保存剂，冷冻时的水的结晶化对细胞骨架的损伤也大，冻融后的细胞存活率降低也成为问题。因此，当务之急是开发出简便性优异、且能够抑制细胞存活率的降低的细胞保存液。

另一方面，海藻糖(trehalose)为葡萄糖以1,1-糖苷键键合而成的二糖之一。海藻糖呈甜味、且具有高的保水力，因此被用于各种食品、化妆品中。此外，海藻糖具有使细胞膜稳定、抑制细胞损伤的性质，因此被用作移植器官时的器官保护液的有效成分。例如，已研制了ET-Kyoto液、New ET-Kyoto液等含有海藻糖的优异的器官保存液(专利文献1及2，非专利文献5)。

葡聚糖(dextran)是由葡萄糖形成的多糖类之一，作为增稠剂、保湿剂等广泛应用于医药品、化妆品领域中。

本申请的发明人已经报道了使用含有海藻糖的生理性水溶液清洗通过蛋白质分解酶处理从细胞培养容器中剥离的间充质干细胞时，间充质干细胞的细胞死亡受到抑制(专利文献3)。当由于蛋白质分解酶处理而导致细胞受到损伤时，细胞死亡(细胞凋亡等)的途径将被诱导，故而可以认为，上述由海藻糖带来的效果是基于细胞凋亡途径被抑制或细胞损伤的修复功能被促进而产生的。另外，本申请的发明人还报道了在间充质干细胞的悬浮液中添加海藻糖、葡聚糖等糖类时，可以抑制短时间(30分钟～6小时)保存时的间充质干细胞的凝集、存活率的降低(专利文献4)。但是，通过并用海藻糖和葡聚糖，是否能够协同性地抑制间充质干细胞等哺乳动物细胞的细胞存活率降低、并协同性地提高活细胞的比例尚不明确。