[发明专利]用于检测RSV的免疫层析装置

说明书

技术领域

本发明涉及特异性识别呼吸道合胞体病毒(RSV)的F蛋白的抗体和特异性识别N蛋白的抗体被固定化的免疫层析装置、以及含有该装置从而形成的RSV的检测用试剂盒。

背景技术

RSV是呼吸道感染症的致病病毒，并且在以下方面具有特征：被病毒感染的细胞形成多核巨细胞(合胞体)。RSV与年龄无关，是在一生中都会引起感染的病毒，但特别是在婴幼儿时期，是成为引起非常严重的症状的原因的病原体。出生后1年以内50～70％以上的婴儿感染该病毒，到3岁为止，几乎全部的幼儿获得了抗体，而出生后数周至数月的期间内的感染最会引起严重的症状。对出生体重低的婴儿或免疫不健全、有心肺类基础疾病的幼儿而言，病情严重化的风险进一步提高。据报道由RSV感染引起的致死率为1～3％，但根据不同情况有相当的差异，并且据1980年代报道，在对心脏有基础疾病的幼儿的住院例的研究中，致死率达37％。

RSV感染症在世界各地均有报道，并且未见地理的、气候的差异。特征在于，在任意区域中，幼弱的婴幼儿均会重症化，并且尤其是在都市中每年均会反复流行。

据报道，RSV感染症约占婴幼儿肺炎诱因的50％，占毛细支气管炎诱因的50～90％。由肺炎、毛细支气管炎等下呼吸道疾病而导致的幼儿的住院数与其说是与流感，不如说是与RSV感染症的流行高峰相一致。据观察流行期内年长儿童和成人中RSV的再次感染是普遍的，但与婴幼儿中的重症化相比，年长儿童和成人中多数情况较轻，仅呈现轻度的感冒样症状。

已知RSV在环境下较不稳定，而在家庭中会高效地感染传播。将病毒带入家庭内的多数是表现出轻度症状的学龄儿童，有报道说有学龄儿童和婴幼儿的家庭中，在流行期，44％的家庭内经历了RSV的感染传播。作为感染的途径，主要是大的呼吸道飞沫、以及通过被来自呼吸道的分泌物污染的手指或物品的接触，尤其经由密切接触而发生。因此，为了预防婴幼儿的感染，极为重要的是，其家庭正确把握有无RSV感染(无论症状的程度)，并在确认感染的情况下，避免与婴幼儿接触，并防止分泌物污染。

从RSV感染、特别是对婴幼儿感染的预防和治疗的观点来看，人们期望简便且灵敏度更高的迅速诊断试剂盒。对于感染了RSV的婴幼儿，希望尽可能在早期开始适当的治疗，因此需要一方面在短时间内能得到检查结果、另一方面即使在感染初期病毒量很少的时期也不会成为假阴性的高灵敏度的检测试剂盒。另外，在婴幼儿的家人表现出感冒症状、疑似RSV感染的情况下，需要检查有无RSV感染且对身体和经济负担小的简易检查方法。

作为满足这样要求的简便且高灵敏度的迅速诊断试剂盒，开发了利用免疫层析法的RSV检测试剂盒。目前，已知多种可用于检测病毒抗原并辅助诊断RSV感染症的利用免疫层析法的检测试剂盒，但那些试剂盒均使用针对RSV的F蛋白的抗体(专利文献1～3)。

RSV的F蛋白是存在于RSV表面的2种主要的糖蛋白中的一种。病毒表面除F蛋白以外还存在G蛋白，G蛋白在RSV亚型A和B之间的同源性只有53％左右，与此相对，F蛋白良好地保持在亚型之间和亚型内。Beeler和Coelingh(1989)的研究表明针对RSV的F蛋白的抗体能与1956～1985年间在美国或澳大利亚的各地分离的全部14种临床分离株结合，并证实了F蛋白非常高度地保存在病毒株之间(专利文献4、非专利文献1)。

通过高度地保存抗原决定基应该能够无遗漏地检测全部临床分离株，为此，在用于检测RSV的试剂盒中使用了针对F蛋白的抗体。然而，在使用通常的RSV检测试剂盒进行RSV检测的情况下，存在用其他的检查方法为阳性的样本的30～40％被判定为阴性的大问题。作为利用免疫层析法的检测试剂盒判定假阴性的较多的原因，据认为可能是试剂盒所使用的针对F蛋白的抗体的结合亲和性不足，结果样本中所含病毒量较少时得不到明确的阳性信号而判定为假阴性。因此，为了开发即使病毒量小也能检测到明确信号的高灵敏度检测试剂盒，尝试制作了对RSV的F蛋白具有高亲和性的单克隆抗体(专利文献5)。然而，仅通过提高针对F蛋白的抗体的亲和性，开发能够无遗漏地检测临床分离株这样的表现出足以实用的阳性检测率的RSV检测试剂盒是非常困难的。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利特开2008-14751号公报

专利文献2：日本专利特开2008-122372号公报

专利文献3：日本专利特开2008-164403号公报

专利文献4：日本专利特表2004-534513号公报

专利文献5：日本专利特开2010-25745号公报