[发明专利]采用修饰的环糊精的蛋白质检测有效
申请号: | 201480036597.3 | 申请日: | 2014-08-08 |
公开(公告)号: | CN105392804B | 公开(公告)日: | 2018-07-10 |
发明(设计)人: | C·T·麦基;W·斯特朗;L·奥列奇;T·伯克曼;C·贝利斯勒 | 申请(专利权)人: | 生物辐射实验室股份有限公司 |
主分类号: | C08B37/16 | 分类号: | C08B37/16 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 杨昀;陶启长 |
地址: | 美国加利*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 标记物 环糊精 蛋白质 可检测 掩蔽 蛋白质检测 芳族氨基酸 分子复合物 检测蛋白质 有机化合物 变化形式 共价连接 结合伴侣 直接检测 紫外光 亲和素 生物素 疏水腔 荧光 侧链 修饰 吲哚 暴露 | ||
1.一种检测蛋白质的方法,所述方法包括:
使所述蛋白质与共价连接至至少一种含吲哚标记物的环糊精接触,所述接触使得环糊精与蛋白质的芳族氨基酸残基结合;
使所述标记物与试剂接触,并使所述蛋白质在所述试剂存在下接触UV光,所述试剂是卤素取代的有机化合物;
引起所述试剂与所述至少一种标记物之间的化学相互作用以形成产物;
检测所述产物,由此检测所述蛋白质。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述环糊精选自下组:α-环糊精、β-环糊精、甲基-β-环糊精和γ-环糊精。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述至少一种标记物共价连接至一个或多个吡喃葡萄糖单位的一个或多个6位处。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,每个环糊精的标记物的平均数量是至少1个。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述至少一种标记物包含色氨酸残基。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述至少一种标记物包含多肽。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述至少一种标记物不包含色氨酸残基。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述卤素取代的有机化合物选自下组:氯仿、三氯乙醇、三氯乙酸酯,和3-溴-1-丙醇。
9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述产物包含取代的吲哚部分,且所述取代的吲哚部分的分子量与未取代的吲哚部分相差28、44或58Da。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述产物包含取代的吲哚部分,且所述取代的吲哚部分包含甲酰基、羧酸、羟基乙酮或丙醇基团。
11.如权利要求1所述的方法,其特征在于,检测所述产物包括检测发射的光。
12.如权利要求1所述的方法,所述方法还包括对所述蛋白质进行凝胶电泳,并且其中在电泳凝胶中检测所述蛋白质。
13.如权利要求12所述的方法,其特征在于,在凝胶电泳之前,使所述蛋白质与所述环糊精和所述试剂接触。
14.如权利要求13所述的方法,其特征在于,所述环糊精和试剂悬浮于缓冲液中,并且所述接触包括使所述蛋白质与所述缓冲液接触。
15.如权利要求12所述的方法,其特征在于,在凝胶电泳之后,使所述蛋白质与所述环糊精和所述试剂接触。
16.如权利要求15所述的方法,其特征在于,所述环糊精和试剂悬浮于缓冲液中,并且使所述电泳凝胶与所述缓冲液接触,由此允许所述环糊精和试剂扩散进入所述电泳凝胶,并使所述蛋白质与所述环糊精和试剂接触。
17.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述环糊精或试剂是所述电泳凝胶的组成部分,并且在对所述蛋白质进行凝胶电泳之时,使所述蛋白质与所述环糊精或所述试剂接触。
18.如权利要求12-17中任一项所述的方法,所述方法还包括:
将所述蛋白质转移出所述电泳凝胶并转移至印迹膜上;和
检测所述印迹膜上的蛋白质。
19.如权利要求18所述的方法,其特征在于,所述方法还包括从所述蛋白质移除环糊精、试剂,或产物。
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