[发明专利]产生中和金黄色葡萄球菌LUKGH(LUKAB)毒素的高效抗体

说明书

背景技术

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是最重要的人类病原体之一，引发人类从无症状定植和中度皮肤感染到严重的深度组织感染、肺炎、血液感染和败血症等范围广泛的各种感染。这种病原体利用几种致病机制引发疾病和干扰宿主防御。它最有效的毒力因子之一是专门杀死白细胞，特别是吞噬细胞的杀白细胞素。LukGH(亦称为LukAB)是最近被鉴定出来的杀白细胞素，能够溶解多形核细胞(PMN)、单核细胞和树突状细胞(Dumontetal,2011；Venturaetal,2010)，还可以激活它们，产生促炎细胞因子。US20110274693A1描述了LukA或LukB抗体，特别是抗-LukA多克隆抗体。

LukGH是一种类似于HlgAB、HlgCB、LukED和LukSF(PVL)的双组分溶细胞素。LukH(S-组分)和LukG(F-组分)与上面提到的双组分杀白细胞素的S组分和F组分分别具有大约30％和40％的氨基酸同源性。

Malachova等人(TheJournalofInfectiousDiseases,Epub2012Aug.7,vol.206,no.8,pp1185-1193)描述了LukGH的纯化，采用SDS-PAGE分析时，LukGH具有两条独立的条带。

LukGH是最多变的双组分金黄色葡萄球菌毒素。虽然LukSF、LukED和HlgABC在不同的金黄色葡萄球菌菌株中高度保守，但是，LukGH显示高达14％的氨基酸变化。这种氨基酸差异水平几乎接近在两种不同毒素如HlgCvsLukS或LukSvsHlgAC或LukE之间观察到的水平(～16％差异性)。关于LukGH的作用的数据很少，而且数据都是采用彼此几乎相同的Newman菌株和LAC菌株(USA300)的两个序列得到的。人们不知道其它变体对人细胞是否有活性，特别是来自两种金黄色葡萄球菌基因组的两个序列——MRSA252(EMRSA16)和MSHR1132(“银”金黄色葡萄球菌)，它们被认为与USA300和其它金黄色葡萄球菌克隆复合物最不相同。

根据金黄色葡萄球菌培养上清液的PMN裂解活性，LukGH似乎是人类天生细胞最有效的白细胞毒素之一(Dumontetal,2013,Maiachowaetal,2012)。因此，有理由认为，在金黄色葡萄球菌引发的疾病期间，通过中和抗体抑制LukGH的毒素作用具有积极的效果，并且通过减少迁移到感染部位的吞噬细胞，支持宿主防御。我们的目的是利用中和LukGH毒素的单克隆抗体，开发出预防和治疗人类金黄色葡萄球菌感染的人类治疗方法。

根据文献，双组分杀白细胞素中的S组分识别细胞表面受体，这种相互作用诱导构象变化，导致F组分结合和形成LukSF和HlgAB的八聚体跨膜孔隙结构(Colin,InfectImmun,1994:3184；Meunier,BiochimBiophysActa,1997:275)。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗金黄色葡萄球菌细胞毒素LukGH(亦称为LukAB)的抗体，这种抗体与这种毒素LukGH的不同变体具有交叉反应性，并提供交叉中和效力。

本发明的目的通过本发明的主题达到。

本发明提供一种包含LukGH复合物的分离的金黄色葡萄球菌杀白细胞素抗原。

特别是，该LukGH复合物包括LukG和LukH组分的二聚体或低聚体。特别是，LukGH复合物是异源二聚体或低聚体LukGH抗原。这种抗原特别是以水相中可溶的异源二聚体或低聚体的形式提供，特别是不与在LukGH结合时容易发生细胞溶解的细胞(如PMN、单核细胞或树突状细胞)的表面结合。

特别是，LukGH复合物由源自金黄色葡萄球菌菌株的重组蛋白与/或蛋白组成。

特别是，LukG和LukH组分由天然来源与/或共-重折叠纯化的重组宿主细胞共表达。

特别是，抗原是以可溶形式的蛋白复合物提供。

特别是，抗原能够与人CD11b/CD18受体结合。

本发明进一步提供一种与LukGH复合物特异性结合的抗体。特别是可以证明，与单独(单体)的LukG或LukH的结合相比，本发明抗体与异源二聚体或低聚体LukGH抗原的结合明显改善很多。

特别是，所述抗体能够中和LukGH复合物。

特别是，抗体与源自USA300克隆，优选源自TCH1516菌株的LukGH复合物，及至少一个LukGH复合物变体结合。