[发明专利]在基因组之间多核苷酸的直接转移

权利要求书

1.一种用于将感兴趣重组多核苷酸从原核供体细胞的染色体直接转移至地衣芽孢杆菌mecA-破坏的受体细胞的染色体中的方法，其中该感兴趣多核苷酸包括至少一种感兴趣编码序列和选择性标记，其中该供体细胞的染色体中的所述感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体细胞的染色体的多核苷酸区域，并且其中这些侧翼多核苷酸区域具有足够的尺寸和序列一致性，以允许与在该受体细胞的染色体中的相应区域进行双同源重组；该方法包括以下步骤：

a)提供来自该供体细胞的染色体DNA，所述DNA包括该感兴趣多核苷酸，该感兴趣多核苷酸的每一侧上的侧翼为衍生自该受体原核细胞的染色体的多核苷酸区域；

b)将该受体细胞用来自步骤(a)的DNA进行转化；并且

c)选择成功转化的受体细胞，其中这种包括该选择性标记的感兴趣多核苷酸已经被整合至该受体细胞的染色体中。

2.如权利要求1所述的方法，其中该原核供体细胞是革兰氏阳性或革兰氏阴性菌。

3.如权利要求2所述的方法，其中该原核供体细胞是芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、链霉菌属、弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、或脲原体属细胞。

4.如权利要求2所述的方法，其中该原核供体细胞是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其中该至少一种感兴趣编码序列编码激素、酶、受体或其部分、抗体或其部分、或报告子。

6.如权利要求5所述的方法，其中该至少一种感兴趣编码序列编码水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶、或转移酶。

7.如权利要求5所述的方法，其中该至少一种感兴趣编码序列编码α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、天冬酰胺酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、绿色荧光蛋白、葡聚糖转移酶、葡糖淀粉酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该至少一种感兴趣编码序列包括操纵子或若干基因。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少100个核苷酸。

10.如权利要求9所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少150个核苷酸。

11.如权利要求9所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少200个核苷酸。

12.如权利要求9所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少250个核苷酸。

13.如权利要求9所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少300个核苷酸。

14.如权利要求9所述的方法，其中衍生自该受体细胞的染色体的这些侧翼多核苷酸区域包括至少350个核苷酸。