[发明专利]甲基丙烯酰-CoA的制造方法

权利要求书

1.一种甲基丙烯酰-CoA的制造方法，在脱水酶的存在下，将3-羟基异丁 酰-CoA向甲基丙烯酰-CoA转变。

2.根据权利要求1所述的制造方法，使用从3-羟基异丁酰-CoA向甲基丙 烯酰-CoA的转变率为50％以上的脱水酶。

3.根据权利要求1或2所述的制造方法，在pH4～10的反应条件下向甲 基丙烯酰-CoA转变。

4.根据权利要求1～3的任一项所述的制造方法，在温度5～80℃的反应 条件下向甲基丙烯酰-CoA转变。

5.根据权利要求1～4的任一项所述的制造方法，在时间1分钟～1周的 反应条件下向甲基丙烯酰-CoA转变。

6.根据权利要求1～5的任一项所述的制造方法，3-羟基异丁酰-CoA由包 含1mM以上渗透压调节剂的水性介质调制而得。

7.根据权利要求1～6的任一项所述的制造方法，在表达编码脱水酶的基 因的转化体的存在下，将3-羟基异丁酰-CoA向甲基丙烯酰-CoA转变。

8.根据权利要求7所述的制造方法，编码脱水酶的基因是微生物来源的 基因。

9.根据权利要求8所述的制造方法，微生物为属于假单胞菌属或红球菌 属的微生物。

10.根据权利要求7所述的制造方法，脱水酶选自由下述(a)～(f)所组成的 组，

(a)包含序列号1或3所示的氨基酸序列的蛋白质；

(b)包含在序列号1或3所示的氨基酸序列中缺失、置换、附加和/或插入 了1个或几个氨基酸的氨基酸序列，并且具有脱水酶活性的蛋白质；

(c)与包含序列号1或3所示的氨基酸序列的蛋白质显示90％以上的同一 性，并且具有脱水酶活性的蛋白质；

(d)由包含序列号2或4所示的碱基序列的DNA编码的蛋白质；

(e)由与包含序列号2或4所示的碱基序列的DNA在严格的条件下杂交的 DNA编码，并且具有脱水酶活性的蛋白质；

(f)由与包含序列号2或4所示的碱基序列的DNA显示90％以上的同一性 的DNA编码，并且具有脱水酶活性的蛋白质。

11.一种甲基丙烯酰-CoA的制造方法，在表达编码微生物来源的脱水酶 的基因的转化体的存在下，使由包含1mM以上渗透压调节剂的水性介质调制 而得的3-羟基异丁酰-CoA水溶液，在pH4～10、温度5～80℃、时间1分钟～ 1周的反应条件下反应，从而以转变率50％以上将3-羟基异丁酰-CoA向甲基 丙烯酰-CoA转变。