[发明专利]二萜的生产

权利要求书

1.包括一种或多种核苷酸序列的重组微生物，所述核苷酸序列编码：

具有内根-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽；

具有内根-贝壳杉烯合酶活性的多肽；

具有内根-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽；和

具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽，

能够催化在甜菊醇的C-13位添加葡萄糖的多肽，

能够催化在甜菊单糖苷的C-13位或在莱鲍迪甙A的C-19位添加葡萄糖的多肽，

能够催化在甜菊双糖苷的C-19位添加葡萄糖的多肽，和

能够催化在甜菊苷的C-13位或在莱鲍迪甙D的C-19位添加葡萄糖的多肽，

通过所述一种或多种核苷酸序列的表达使所述微生物具有至少生产莱鲍迪甙M的能力。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其中所述微生物能够表达编码具有NADPH-细胞色素p450还原酶活性的多肽的核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的重组微生物，其能够表达以下的一种或更多种：

a.编码具有内根-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括：

i.编码具有内根-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQID NO：2、4、6、8、18、20、60或62的氨基酸序列的序列同一性至少约20％的氨基酸序列；

ii.与SEQ ID NO：1、3、5、7、17、19、59、61、141、142、151、152、153、154、159、160、182或184的核苷酸序列的序列同一性至少约15％的核苷酸序列；

iii.其互补链与序列(i)或(ii)的核酸分子杂交的核苷酸序列；或者

iv.由于遗传密码的简并性而不同于(i)、(ii)或(iii)的核酸分子序列的核苷酸序列，

b.编码具有内根-贝壳杉烯合酶活性的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括：

i.编码具有内根-贝壳杉烯合酶活性的多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQ IDNO：10、12、14、16、18、20、64或66的氨基酸序列的序列同一性至少约20％的氨基酸序列；

ii.与SEQ ID NO：9、11、13、15、17、19、63、65、143、144、155、156、157、158、159、160、183或184的核苷酸序列的序列同一性至少约15％的核苷酸序列；

iii.其互补链与序列(i)或(ii)的核酸分子杂交的核苷酸序列；或者

iv.由于遗传密码的简并性而不同于(i)、(ii)或(iii)的核酸分子序列的核苷酸序列，

c.编码具有内根-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括：

i.编码具有内根-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQ IDNO：22、24、26、68或86的氨基酸序列的序列同一性至少约20％的氨基酸序列；

ii.与SEQ ID NO：21、23、25、67、85、145、161、162、163、180或186的核苷酸序列的序列同一性至少约15％的核苷酸序列；

iii.其互补链与序列(i)或(ii)的核酸分子杂交的核苷酸序列；或者

iv.由于遗传密码的简并性而不同于(i)、(ii)或(iii)的核酸分子序列的核苷酸序列；或者

d.编码具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括：

i.编码具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽的核苷酸序列，所述多肽包含与SEQ IDNO：28、30、32、34、70、90、92、94、96或98的氨基酸序列的序列同一性至少约20％的氨基酸序列；

ii.与SEQ ID NO：27、29、31、33、69、89、91、93、95、97、146、164、165、166、167或185的核苷酸序列的序列同一性至少约15％的核苷酸序列；

iii.其互补链与序列(i)或(ii)的核酸分子杂交的核苷酸序列；或者

iv.由于遗传密码的简并性而不同于(i)、(ii)或(iii)的核酸分子序列的核苷酸序列。