[发明专利]缺乏lincRNA的非人类动物

权利要求书

1.一种产生非人类动物的方法，包括修饰所述非人类动物使其在其基因组中包含至少一个内源性修饰的长链基因间非编码RNA (lincRNA)基因座的敲除，

其中

所述至少一个修饰的lincRNA基因座包括用插入核酸置换所述lincRNA基因座或其部分,

所述置换导致缺失全部或大部分编码所述lincRNA的序列，

所述缺失导致所述lincRNA的功能缺失型突变，

所述插入核酸包含编码报道基因的第一核苷酸序列，并且其位于与所述内源lincRNA启动子可操作地连接的位置，

所述内源lincRNA启动子驱动所述第一核苷酸序列的表达，

所述第一核酸序列的表达遵循所述lincRNA的表达模式，并且

所述非人类动物展现与所述lincRNA的功能缺失型突变相关联的表型；

其中

i)所述lincRNA是Pint，其中所述功能缺失型突变包括在基因坐标Chromosome 6:31166026–31197846之间的所述Pint基因座缺失基因组序列，并且所述功能缺失型突变使得所述小鼠展现：

(a) 过早衰老相关表型；

(b) 相比于野生型对照的较缓慢生长速率；

(c) 肌肉力量下降；

(d) 纤维化；

(e) 相比于野生型对照的较低体脂含量；

(f) 相比于野生型对照的较低股骨骨矿物质密度和骨质量；

(g) 相比于野生型对照降低的肌肉质量；

(h) 中值寿命降低；

(i) 脊椎弯曲；

(j) 器官萎缩；

(k) 脑发育缺陷；或

(l) (a)-(k)的其任何组合; 或者

ii)所述lincRNA是Fendrr，其中所述功能缺失型突变包括在基因坐标Chromosome 8:121054882–121074065之间的所述Fendrr基因座缺失基因组序列，并且所述功能缺失型突变使得所述小鼠展现围产期致死和/或肺发育缺陷；或者

iii)其中所述lincRNA是HOTTIP，其中所述功能缺失型突变包括在基因坐标Chromosome 6: 52262834–52267603或Chromosome 6: 52265374–52267603之间的所述HOTTIP基因座缺失基因组序列，并且所述功能缺失型突变使得所述小鼠展现至少一种骨骼和/或肌肉形态或功能缺陷；或者

iv) 其中所述lincRNA是Peril，其中所述功能缺失型突变包括在基因坐标Chromosome3: 34767849–34782292之间的所述Peril基因座缺失基因组序列，并且所述功能缺失型突变使得所述小鼠展现脑发育缺陷、过早衰老相关表型和/或围产期致死。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述插入核酸进一步包含编码可选择标记的第二核酸序列。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述第二核酸序列可操作地连接至驱动所述可选择标记的表达的启动子。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述插入核酸包含侧接编码所述报道基因的区段和/或编码所述可选择标记的区段的位点特异性重组位点。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述第一核苷酸序列进一步包含Kozak共有序列，所述Kozak共有序列与编码报道基因的序列可操作地连接。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述报道基因是β-半乳糖苷酶，并且所述基因座能够报道所述lincRNA基因的转录活性。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述非人动物针对所述敲除的修饰的lincRNA基因座是纯合子。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述非人动物是啮齿动物。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述非人动物是大鼠或小鼠。