[发明专利]细胞群体、转分化的方法及其使用方法

权利要求书

1.在体外产生具有成熟的胰腺β细胞样表型和功能的转分化细胞群体的方法，其包括：

(a)获得富集易于转分化的细胞的成年哺乳动物的肝细胞群体，其中所述富集的群体通过提供成年哺乳动物的肝细胞群体并分离细胞的亚群体获得，所述细胞的亚群体包括：

(i)有活性的无翅型MMTV整合位点家族(Wnt)信号通路；或

(ii)来自谷氨酰胺合成酶应答元件(GSRE)的提高表达；或

(iii)Homer支架蛋白(HOMER1)、溶酶体相关膜蛋白3(LAMP3)或骨形态发生蛋白受体2型(BMPR2)、或者其任意组合的表达提高；或

(iv)ATP结合盒亚族B成员1(ABCB1)、整合素亚单位α4(ITGA4)、ATP结合盒亚族B成员4(ABCB4)、或朊蛋白(PRNP)、或其任意组合的表达降低；

或者其任意组合；

(b)于第一时间段，在允许摄取胰腺和十二指肠同源框(PDX-1)多肽或编码胰腺和十二指肠同源框(PDX-1)多肽的核酸的条件下，将所述富集的成年哺乳动物非胰腺β细胞群体与所述的胰腺和十二指肠同源框(PDX-1)多肽或编码胰腺和十二指肠同源框(PDX-1)多肽的核酸接触；

(c)于第二时间段，在允许摄取Pax-4多肽、或NeuroD1多肽、或编码Pax-4多肽的核酸、或编码NeuroD1多肽的核酸的条件下，将步骤(b)的细胞群体与所述的Pax-4多肽、或NeuroD1多肽、或编码Pax-4多肽的核酸、或编码NeuroD1多肽的核酸接触；和

(d)于第三时间段，在允许摄取MafA多肽或编码MafA多肽的核酸的条件下，将步骤(c)的细胞群体与所述的MafA多肽或编码MafA多肽的核酸接触；

其中第二时间段为第一时间段之后至少24小时或者与第一时间段同时，并且其中第三时间段为第二时间段之后至少24小时；

由此产生具有成熟的胰腺β细胞样表型和功能的转分化细胞群体。

2.权利要求1的方法，其中第二时间段与第一时间段同时，且编码PDX-1多肽的核酸进一步编码NeuroD1多肽或Pax-4多肽。

3.权利要求1的方法，其中所述易于转分化的肝细胞包含外周肝细胞。

4.权利要求1的方法，其中相比于从非富集的群体产生的成熟的转分化细胞的百分比(％)，所述转分化细胞群体包括增加％的具有所述成熟的胰腺β细胞样表型和功能的转分化细胞。

5.权利要求1的方法，其中相比于未转分化的成年哺乳动物的肝细胞对照群体，所述成熟的胰腺β细胞样表型和功能包括增加的胰岛素产生、或增加的葡萄糖调节的胰岛素分泌、或增加的葡萄糖调节的C肽分泌，或其任意组合。

6.权利要求5的方法，其中所述增加的胰岛素产生、增加的葡萄糖调节的胰岛素分泌、或增加的葡萄糖调节的C肽分泌与Isl1基因表达的降低或生长激素抑制素的降低产生或其任意组合相组合。

7.权利要求1的方法，其中所述成熟的胰腺β细胞样表型包括相比于未转分化的成年哺乳动物的肝细胞对照群体，增加的胰高血糖素基因表达。