[发明专利]多巴胺能神经元的制备方法

说明书

本发明提供由神经前体细胞非常有效地制备高品质多巴胺能神经元的方法,具体地,提供多巴胺能神经元的制备方法,该方法包括在培养基中培养神经前体细胞的步骤,所述培养基含有：(i)cAMP类似物,和(ii)MEK抑制剂。而且，本发明还提供含有由该方法得到的多巴胺能神经元的药物，以及用于该方法的试剂和试剂盒。

技术领域

本发明涉及多巴胺能神经元(dopaminergic neuron)的制备方法。而且，本发明还提供含有由该方法得到的多巴胺能神经元的药物，以及用于该方法的试剂和试剂盒。

(发明背景)

多巴胺(3,4-二羟基苯基乙基胺)是具有多种作用的生物学分子，主要作为中枢神经系统中的神经递质发挥作用。在生物体中，多巴胺是以氨基酸酪氨酸为起点，通过酪氨酸羟化酶和DOPA脱羧酶这两种酶的作用而在细胞内生物合成的。

多巴胺能神经元是能够合成和释放多巴胺作为神经递质的神经细胞。在脑中，它主要存在于中脑，并且部分地存在于下丘脑。存在于中脑的多巴胺能神经元在运动和情绪控制中扮演重要角色。当中脑多巴胺能神经元变性或脱落时，例如能够引起严重的神经退行性疾病例如帕金森氏病等。最为期待的治疗这样的神经退行性疾病的一种治疗方式是细胞移植治疗，包括对对象进行多巴胺能神经元移植。

作为获得多巴胺能神经元的方法，目前已知有下述方法，该方法包括：将干细胞例如胚胎干细胞(本说明书中有时记作ES细胞)、人工多能性干细胞(本说明书中有时记作iPScell)等分化为神经外胚层，并进一步诱导分化为多巴胺能神经元。

最近，有报道称由底板细胞生产了中脑多巴胺能神经元。此外，接连报道了下述方法：通过使用两种SMAD(Small Mothers Against Decapentaplegic)信号抑制剂，将干细胞分化为底板细胞来得到中脑多巴胺能神经元的方法(专利文献1,非专利文献1)，由人干细胞诱导底板细胞并且与神经营养因子一起培养底板细胞来诱导中脑多巴胺能神经元的方法(专利文献2,非专利文献2-4)，以及通过将人ES细胞与GSK3beta抑制剂和激活素/Nodal抑制剂反应来有效诱导底板细胞的方法(非专利文献5)。

然而，这些方法得到的多巴胺能神经元的生产效率仍然停留在低水平，并且由于它们不能在体外再现对于氧化应激和药物刺激的应答性等，所述细胞是功能不充分的。因此，仍然需要开发有效得到高品质的多巴胺能神经元的方法。

文献列表

[专利文献]

[专利文献1]US-B-2012/0094381

[专利文献2]WO 2013/067362

[非专利文献]

[非专利文献1]Fasano等,Cell干细胞6(2010)336-347

[非专利文献2]Kriks等,Nature 480(2011)547-553

[非专利文献3]Kirkeby等,Cell Reports 1(2012)703-714

[非专利文献4]Xi等,干细胞s 30(2012)1655-1663

[非专利文献5]Denham等,干细胞s 30(2012)2400-2411

发明概述

发明所要解决的问题

本发明的目的是提供更有效制备高品的多巴胺能神经元的方法。本发明的目的还在于提供含有由所述方法得到的多巴胺能神经元的药物，以及用于所述方法的试剂和试剂盒。

解决问题的手段