[发明专利]RNA指导的基因编辑和基因调节

权利要求书

1.一种结合人γ珠蛋白基因的DNA打靶系统，其包含至少一种指导RNA (gRNA)和包含2个异源多肽结构域的融合蛋白，其中所述第一多肽结构域包含成簇有规间隔短回文重复序列相关(Cas)蛋白，并且所述第二多肽结构域具有选自以下的活性：转录激活活性、转录阻遏活性、转录释放因子活性、组蛋白修饰活性、核酸酶活性、核酸缔合活性、甲基化酶活性和脱甲基酶活性，其中所述Cas蛋白包含Cas9，并且其中所述至少一种gRNA结合和靶向SEQ IDNO: 33、34、35或36的多核苷酸序列。

2.权利要求1的DNA打靶系统，其中所述至少一种gRNA包含与所述多核苷酸序列互补的12-22个核苷酸。

3.权利要求2的DNA打靶系统，其中所述Cas9包含失活Cas9的核酸酶活性的至少一个氨基酸突变。

4.权利要求3的DNA打靶系统，其中所述至少一个氨基酸突变是D10A和H840A的至少一个。

5.权利要求1的DNA打靶系统，其中所述Cas蛋白包含SEQ ID NO: 1的氨基酸36-1403。

6.权利要求1-5中任一项的DNA打靶系统，其还包含使第一多肽结构域与第二多肽结构域连接的接头。

7.权利要求1-5中任一项的DNA打靶系统，其中所述第二多肽结构域具有转录激活活性。

8.权利要求7的DNA打靶系统，其中所述第二多肽结构域包含至少一个VP16转录激活结构域重复序列。

9.权利要求7的DNA打靶系统，其中所述第二多肽结构域包含VP64或p65激活结构域。

10.权利要求7的DNA打靶系统，其中所述融合蛋白包含dCas9-VP64，其中dCas9是具有失活Cas9的核酸酶活性的至少一个氨基酸突变的Cas9蛋白。

11.权利要求10的DNA打靶系统，其中所述至少一个氨基酸突变是D10A和H840A的至少一个。

12.权利要求1-5中任一项的DNA打靶系统，其中所述第二多肽结构域具有转录阻遏活性。

13.权利要求12的DNA打靶系统，其中所述第二多肽结构域包含KRAB结构域。

14.权利要求1-5中任一项的DNA打靶系统，其中第二多肽结构域包含p300结构域。

15.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-14中任一项的DNA打靶系统。

16.一种载体，其包含权利要求15的分离的多核苷酸。

17.一种细胞，其包含权利要求15的分离的多核苷酸。

18.一种药物，其包含权利要求1-14中任一项的DNA打靶系统、权利要求15的分离的多核苷酸或权利要求16的载体。

19.一种药盒，其包含权利要求1-14中任一项的DNA打靶系统、权利要求15的分离的多核苷酸或权利要求16的载体。

20.一种用于调节细胞中的哺乳动物基因表达的组合物，所述组合物包含权利要求1-14中任一项的DNA打靶系统、权利要求15的分离的多核苷酸或权利要求16的载体。