[发明专利]靶向抗生素敏感性测试的方法

权利要求书

1.测定微生物细胞对抗生素的敏感性的方法，所述方法包括：

从怀疑含有所述微生物细胞的第二样品中获得至少一个主等分试样和参考等分试样，其中所述主等分试样和所述参考等分试样含有生长培养基；

向所述主等分试样添加至少一种所选择的抗生素，所述所选择的抗生素至少部分地基于在第一样品上进行的多重鉴定测试组的结果而选择，其中所述第一样品和所述第二样品来自共同的受试者；

在适合于促进微生物生长的条件下孵育所述主等分试样和所述参考等分试样，以测试所述所选择的抗生素的效力；

从所述主等分试样中分离微生物细胞，并将所分离的微生物细胞重悬，以获得主悬浮物；

从所述参考等分试样中分离微生物细胞，并将所分离的微生物细胞重悬，以获得参考悬浮物；

裂解所述主悬浮物和所述参考悬浮物中的微生物细胞，从而获得主裂解物和参考裂解物;

对所述主裂解物进行逆转录和扩增，以检测与所述多重鉴定测试组成员相关的核酸，从而获得主分析信号；

对所述参考裂解物进行逆转录和扩增，以检测与所述多重鉴定测试组成员相关的核酸，从而获得参考分析信号;

比较所述主分析信号和所述参考分析信号，以获得所述微生物细胞对所述所选择的抗生素的敏感性的量度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中进行所述逆转录和扩增以检测rRNA，且其中所述主分析信号相对于所述参考分析信号的降低指示所述微生物细胞对所述所选择的抗生素的敏感性。

3.根据权利要求1所述的方法，其中进行所述逆转录和扩增以检测tmRNA，且其中所述主分析信号相对于所述参考分析信号的降低指示所述微生物细胞对所述所选择的抗生素的敏感性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中进行所述逆转录和扩增以检测mRNA，且其中采用所述主分析信号相对于所述参考分析信号的变化来确定所述微生物细胞对所述所选择的抗生素的敏感性的量度。

5.根据权利要求4所述的方法，其还包括使所述主等分试样和所述参考等分试样接受配置成诱导mRNA的产生的刺激，其中选择所述刺激以使得敏感性和/或耐受性微生物细胞的mRNA的产生因所述微生物细胞暴露于所述抗生素而改变。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述逆转录和扩增检测多种核酸序列，使得所述多种核酸序列包括与所述多重鉴定测试组成员相关的核酸序列。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述逆转录和扩增检测至少一种核酸序列，所述核酸序列在两种或更多种类型的通过所述多重鉴定测试组可检测的微生物细胞之间是保守的。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中通过离心分离所述微生物细胞。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中通过过滤分离所述微生物细胞。

10.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述第一样品和所述第二样品是全血样品，所述方法还包括在获得所述主等分试样和所述参考等分试样之前，将第一血裂解剂添加到所述第二样品中。

11.根据权利要求10所述的方法，其还包括在向所述第二样品添加所述第一血裂解剂之后，对所述第二样品进行离心，并取出至少一部分上清液。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一血裂解剂包含皂素和SPS，其中皂素和SPS在混合全血和所述第一血裂解剂后的浓度分别为1.0 mg/mL至10 mg/mL和0.5 mg/mL至2 mg/mL。

13.根据权利要求10所述的方法，其还包括在从所述主等分试样中分离所述微生物细胞之前，将第二血裂解剂添加到所述主等分试样中。