[发明专利]用于检测幽门螺杆菌感染的方法

说明书

本发明涉及用于在对象中检测幽门螺杆菌(H.pylori)感染的方法，其中所述方法包括在来自所述对象的样品中检测针对FliD的免疫应答，其中所述免疫应答包括抗FliD抗体。

本发明涉及用于检测螺杆菌(Helicobacter)感染并且更特别地用于检测幽门螺杆菌(H.pylori)感染的方法，免疫应答作为生物标志物的用途，螺杆菌蛋白质作为生物标志物的用途，编码螺杆菌蛋白质的核酸作为生物标志物的用途，以及用于在检测螺杆菌感染并且更特别地用于检测幽门螺杆菌感染之方法中使用的试剂盒。

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)，是一种微需氧的革兰氏阴性螺旋菌，其定居在约一半世界人口中并且被认为是人特有的胃部病原体(Michetti等，1999)。大多数感染个体患有无症状的慢性胃炎。然而，在一些对象中，感染引起慢性胃炎、消化性溃疡形成和萎缩，并且在粘膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤、胃腺癌和原发性胃非霍奇金氏淋巴瘤的形成中发挥着重要作用(Suganuma等，2001)。

世界卫生组织将幽门螺杆菌归类为I类致癌原(Goto等，1999)，并且已在动物模型中证明了致癌作用的直接证据(Honda等，1998；T.Watanabe等，1998)。根除幽门螺杆菌可以预防人类的胃癌(Uemura等，2001)。在高胃癌风险的群体中考虑了测试&治疗策略(Yamaoka等，1998)。然而，这些方法因缺少有效且可负担的筛选系统(尤其是对于社会经济地位较低的国家)而受到阻碍。在这些国家中，仅血清学测试可应用，其中大多数具有不良的性能或者没有经过很好的验证。对于幽门螺杆菌血清学，已知且描述了数种特异性单一标志物。这些因素已被应用于多种诊断方法，但是其几乎所有都具有很大的限制使得其不适用于幽门螺杆菌诊断。例如，细胞毒素相关蛋白(cytotoxin-associated protein，CagA)是表征非常良好的幽门螺杆菌蛋白质。其在cag-PAI(细胞毒素相关基因毒力岛)上进行编码并且被描述为致癌蛋白质(Franco等，2005；Murata-Kamiya等，2007)。这种蛋白质也是高免疫原性抗原，使得其可成为血清学测试经常采用的标志物。CagA阳性可以被用作幽门螺杆菌毒力的指示物，原因是感染CagA阳性菌株的个体处于发生胃与十二指肠疾病的较高风险下。然而，其不适于用作单一标志物，原因是仅幽门螺杆菌菌株的亚组为CagA阳性。而且，CagA阳性不是活性感染的特点，原因是根除了幽门螺杆菌的患者多年维持着针对CagA的抗体(Fusconi等，1999)。因此，其在血清学测试中应一直与其他适当的抗原组合以确定阳性。另一种表征良好的幽门螺杆菌蛋白质是空泡细胞毒素(vacuolating cytotoxin，VacA)。报道称，其引起暴露于幽门螺旋杆菌上清液或经纯化蛋白质的细胞中的空泡形成(Cover&Blaser，1992)。vacA基因编码140kDa的原毒素，其中氨基端信号序列和羧基端片段在分泌期间被蛋白质水解切割，从而产生了分子质量为88kDa的活性蛋白质，所述活性蛋白质聚集成六聚体并形成孔(Montecucco&de Bernard，2003)。该蛋白质由两个不同的区域组成。信号序列(s1a、s1b、s2)和中间区域(m1、m2)，二者均具有似乎调控细胞毒性活性的高等位基因变化(Atherton等，1995)。VacA的高多样性使得该蛋白质不适用于血清学测试。

另一种表征很好的幽门螺杆菌蛋白质GroEL属于分子伴侣家族，其是许多蛋白质在应力条件下进行适当折叠所需的(Dunn等，1992)。在不同的研究中，表明该蛋白质在不同的幽门螺杆菌菌株中是高度保守的，并且其血清阳性甚至高于感染患者中对于CagA的血清阳性(Macchia等，1993；Suerbaum等，1994)。另外，在由本发明人进行的研究中，观察到GroEL的阳性血清状态在德国胃癌患者中比在匹配对照中更为常见(数据未公开)。另外，表明针对GroEL的抗体在幽门螺杆菌感染的疾病相关损失之后持续得更久。因此，GroEL可为适用于现症感染或既往感染的标志物，并且可有助于克服由于感染清除而低估幽门螺杆菌相关胃癌风险的问题(Gao等，2009)。