[发明专利]用于对有丝分裂后细胞的疾病和障碍进行靶向和建模的系统、方法和组合物的递送、工程化和优化

权利要求书

1.一种通过操纵感兴趣的基因组座位中的有丝分裂后细胞靶序列来修饰生物或非人 类生物从而引起该细胞中的表型改变的方法，该方法包括

递送非天然存在的或工程化的组合物，该组合物包含：

(A)-I.CRISPR-Cas系统RNA多核苷酸序列，其中该多核苷酸序列包含：

(a)指导序列，该指导序列能够杂交到真核细胞中的有丝分裂后细胞靶序列上，

(b)tracr配对序列，和

(c)tracr序列，以及

II.编码CRISPR酶的多核苷酸序列，该CRISPR酶任选地包含至少一个或多个核定位序 列，

其中(a)、(b)和(c)以5’到3’方向排列，

其中在转录时，该tracr配对序列杂交到该tracr序列上，并且该指导序列引导CRISPR 复合物与该有丝分裂后细胞靶序列的序列特异性结合，并且

其中该CRISPR复合物包含与(1)杂交到该有丝分裂后细胞靶序列上的该指导序列、和 (2)杂交到该tracr序列上的该tracr配对序列复合的CRISPR酶，并且编码CRISPR酶的多核 苷酸序列是DNA或RNA，

其中编码该CRISPR酶的多核苷酸序列可操作地连接至该CRISPR酶的表达的一个或多 个调节序列，借此在该CRISPR酶的表达的情况下在该有丝分裂后细胞中存在该CRISPR复合 物的组装，以及其操纵。

2.如权利要求1所述的方法，其中编码CRISPR酶的多核苷酸序列、指导序列、tracr配对 序列或tracr序列的任一者或全部可以是RNA。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中对该编码CRISPR酶的序列、该指导序列、tracr配 对序列或tracr序列进行编码的多核苷酸可以是RNA并且可以经由脂质体、纳米粒子、外泌 体、微囊泡、或基因枪进行递送。

4.如权利要求1到3中任一项所述的方法，其中这些多核苷酸被包含在含有一种或多种 载体的载体系统中。

5.一种通过操纵感兴趣的基因组座位中的有丝分裂后细胞靶序列来修饰生物或非人 类生物的方法，该方法包括

递送包含病毒载体系统的非天然存在的或工程化的组合物，该病毒载体系统包含一种 或多种病毒载体，该一种或多种病毒载体可操作地编码用于其表达的组合物，其中该非天 然存在的或工程化的组合物包括：

非天然存在的或工程化的组合物，该组合物包含载体系统，该载体系统包含一种或多 种载体，该一种或多种载体包含

I.第一调节元件，该第一调节元件可操作地连接到CRISPR-Cas系统RNA多核苷酸序列 上，其中该多核苷酸序列包含

(A)指导序列，该指导序列能够杂交到真核细胞中的肾脏靶序列上，

(b)tracr配对序列，和

(c)tracr序列，以及

II.第二调节元件，该第二调节元件可操作地连接到编码CRISPR酶的酶编码序列上，该 CRISPR酶任选地包含至少一个或多个核定位序列，

其中(A)、(b)和(c)以5’到3’方向排列，

其中组分I和II位于该系统的相同或不同载体上，

其中在转录时，该tracr配对序列杂交到该tracr序列上，并且该指导序列引导CRISPR 复合物与该肾脏靶序列的序列特异性结合，并且

其中该CRISPR复合物包含与(1)杂交到该肾脏靶序列上的该指导序列、和(2)杂交到该 tracr序列上的该tracr配对序列复合的CRISPR酶。

6.如权利要求5所述的方法，其中这些病毒载体的一种或多种可以经由脂质体、纳米粒 子、外泌体、微囊泡、或基因枪进行递送。