[发明专利]细胞培养制品及其方法

说明书

一种细胞培养制品，其包含：基材，该基材包含选自下述中的至少一种的聚半乳糖醛酸化合物：果胶酸；酯化度为1‑40摩尔％的部分酯化的果胶酸,或其盐；和聚半乳糖醛酸化合物的表面上的粘合聚合物。还揭示了制造和使用该制品的方法。

本申请要求2013年06月24日提交的美国临时申请号61/838452的优先权，其全文通过引用结合于此。

本文所述的任何出版物或专利文献的全文内容通过参考结合于本文。

相关申请的交叉引用

本申请涉及以下共同拥有和转让的专利申请：2011年3月17日提交的美国临时专利申请号61/453,654，其题目为“用于细胞培养的合成涂层”；2010年05月27日提交的美国专利申请号12/788917，其题目为“用于培养细胞的可溶胀的合成的微载体；2010年7月28日提交的专利申请号PCT/IB10/002160,其题目为“用于细胞培养涂层的预聚物制备”；和2012年04月13日提交的美国专利申请号13/446734，其题目为“用于细胞培养的合成的组合物和涂层”。本文以上述文献的内容为基础，且以上各文的全部内容通过引用纳入本文，但不要求它们的优先权。

背景

本发明总体涉及细胞培养制品,例如微载体,以及制备和使用制品的方法。

概述

在一些实施方式中,本发明提供细胞培养制品,例如具有化学改性的表面的基材,以及制备和使用制品的方法。

在一些实施方式中,本发明提供完全合成的细胞培养制品，其使得能在纯化学培养基或不含血清的培养基中进行细胞培养，并允许在不使用任何蛋白酶的情况下收集培养的细胞。

在优选实施方式中，所述基材是微载体。本发明的微载体特别适用于纯化学培养基中的大规模的细胞增殖。微载体可支持纯化学培养基中的细胞生长。

附图简要说明

在本发明的实施方式中：

图1A和1B分别显示在PGA微载体上的衍生自人骨髓的间质干细胞(hMSC)的粘合和生长的示例性相差显微图，该PGA微载体用粘合聚合物Synthemax II(“PGA-SMII”)进行涂覆并在旋转烧瓶预搅拌的培养基中培养3天,图片(1B)显示在旋转烧瓶中培养5天之后测量的细胞扩增。

图2显示在用100U果胶酶/5mMEDTA进行5分钟处理之后，来自PGA-SMII微载体的细胞释放的相差显微图。

图3的图片显示沿着6次迁移的旋转烧瓶中在PGA-SMII微载体上的hMSC生长的累积的细胞扩增。

图4的图表显示通过流式细胞仪测量的在PGA-SMII微载体上生长40天的hMSC细胞的间叶特异性标记物(mesenchymal specific markers)。

图5A-5C显示PGA-SMII微载体上不同hMSC细胞系的分化的相差显微图。

图6显示静态条件下用SMII或PGA-SMII小珠涂覆的酯化的果胶(20-32％)上的hMSC粘合的相差显微图。

图7A-7E显示hMSC的相差显微图的总结，其于静态条件下在不同小珠表面上接种，用于非优化过程。

图8A-8C显示来自具有选定的处理的PGA-SMII微载体的细胞释放的相差显微图。

图9显示示例性粘合聚合物；肽共轭聚合物结构,即现有技术的p(MAA-PEG₄-VN)。

图10显示另一示例性粘合聚合物；肽共轭聚合物结构，即现有技术的p(HEMA-共聚-MAA-PEG₄-VN)。

详细描述