[发明专利]具有逆向乙醛酸支路的重组植物和微生物

权利要求书

1.一种重组微生物，所述重组微生物包含用于由四碳底物合成乙酰辅 酶A和异柠檬酸的代谢途径，所述代谢途径使用包含具有苹果酸硫激酶活 性、苹果酰辅酶A裂解酶活性和/或异柠檬酸裂解酶活性的一种或多种多 肽的途径。

2.如权利要求1所述的重组微生物，其中所述微生物是原核生物或真 核生物。

3.如权利要求2所述的重组微生物，其中所述微生物是酵母。

4.如权利要求2所述的重组微生物，其中所述微生物是原核生物。

5.如权利要求4所述的重组微生物，其中所述微生物源自于大肠杆菌 (E.coli)微生物。

6.如权利要求5所述的重组微生物，其中所述大肠杆菌被工程化以表 达苹果酸硫激酶。

7.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述苹果酸硫激 酶是从荚膜甲基球菌(Methylococcuscapsulatus)克隆的。

8.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述苹果酸硫激 酶包含来自荚膜甲基球菌的sucC-2和sucD-2的异二聚体。

9.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述苹果酸硫激 酶包含与SEQIDNO:2和4具有至少40％至100％同一性的序列并且将苹 果酸转化成苹果酰辅酶A。

10.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述重组微生 物被工程化以表达苹果酰辅酶A裂解酶。

11.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述苹果酰辅 酶A裂解酶是从类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)克隆的。

12.如权利要求11所述的重组微生物，其中所述苹果酰辅酶A裂解酶 包含来自类球红细菌的mcl1。

13.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述苹果酰辅 酶A裂解酶包含与SEQIDNO:8具有至少40％至100％同一性的序列并且 将苹果酰辅酶A转化成乙醛酸。

14.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述重组微生 物被工程化以表达或过表达异柠檬酸裂解酶。

15.如权利要求14所述的重组微生物，其中所述异柠檬酸裂解酶是从 大肠杆菌克隆的。

16.如权利要求15所述的重组微生物，其中所述异柠檬酸裂解酶包含 来自大肠杆菌的aceA。

17.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述异柠檬酸 裂解酶包含与SEQIDNO:10具有至少40％至100％同一性的序列并且将乙 醛酸和丁二酸转化成异柠檬酸。

18.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，所述重组微生物进 一步包含表达或过表达苹果酸脱氢酶。

19.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述微生物被 工程化以异源表达下列酶中的一种或多种：

(a)苹果酸硫激酶；

(b)苹果酰辅酶A裂解酶；以及

(c)异柠檬酸裂解酶。

20.如权利要求19所述的重组微生物，其中所述微生物被进一步工程 化以表达或过表达苹果酸脱氢酶。

21.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述微生物被 进一步工程化以表达或过表达顺乌头酸酶。

22.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述微生物被 进一步工程化以表达或过表达ATP柠檬酸裂解酶。

23.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，所述重组微生物进 一步包含选自由atoB、hbd、crt、ter以及adhE2组成的组的一种或多种基 因，并且其中所述微生物产生1-丁醇。