[发明专利]在细胞培养物中大规模生产病毒

说明书

在细胞培养物中生产病毒的方法，其包括至少下列步骤：a)提供在细胞培养基中的细胞群体，b)通过如下感染细胞群体：i.用病毒接种所述群体，以及ii.孵育接种的群体以便允许病毒复制和繁殖，c）收集生产的病毒由此提供病毒收获物，和d）纯化病毒，其中至少在步骤b）期间将至少15 W/m³、至少30 W/m³、至少60 W/m³、至少100 W/m³、至少120 W/m³的功率密度施加到细胞培养物。

本发明用美国政府的支持在Department of Health and Human Services授予的合同# HHSO100200600011C下进行；美国政府在本发明中享有某些权利。

技术领域

本发明涉及用于生产由细胞培养物产生的病毒或病毒抗原的方法，可以通过该方法获得的病毒或病毒抗原以及含有这些病毒或病毒抗原的疫苗。特别是，本发明提供用于改善病毒产率的方法。

背景

作为用于制造病毒疫苗的传统的基于蛋(egg-based)的生产系统的替代方案的基于细胞培养物的技术的开发可能表现为克服与基于蛋的传统系统相关的缺点和限制的最快速和最有希望的解决方案。病毒疫苗的商业生产通常需要大量病毒作为抗原来源。但是基于蛋的方法由于蛋的变化的生物学品质而是有缺点的，并且其由于大量合适的蛋的不可获得性导致的逻辑问题而缺少灵活性。

细胞培养系统表现为疫苗制备的合适的可替代模式，更简单，灵活的，且一致的，允许改进扩大规模疫苗生产能力的可能性，并因此如果需要的话允许获得大量病毒。例如，应对自然大流行威胁或恐怖袭击。

但是有效的疫苗生产需要从宿主系统以高产率产生的大规模量的病毒生长。在其中病毒生长的培养条件在实现可接受的高病毒产率方面是非常重要的。因此，为了最大化所需病毒的产率，系统和培养条件必须专门进行改造以提供适合用于大规模生产的对所需病毒的生产有利的环境。一种方法是改善细胞比生产率，例如通过改良培养基或增加细胞密度。由于在生产后细胞培养物产生的病毒必须从细胞培养物中回收并纯化的事实，改善病毒产率的另一种方法是限制在不同纯化步骤过程中发生的病毒材料丢失。因此，仍然存在需要以提供可替代的和改进的具有增加的病毒产率的生产病毒的方法。根据本发明的方法提供相比本领域已知的方法更好的病毒产率。

发明概述

在本发明的第一方面，提供了在细胞培养物中生产病毒的方法，包括至少下列步骤：

a）提供在细胞培养基中的细胞群体，

b）通过如下感染细胞群体：

i. 用病毒接种所述群体，和

ii. 孵育被接种的群体以便允许病毒复制和繁殖，

c）收集产生的病毒，由此提供病毒收获物，和

d）纯化病毒，

其中至少在步骤b）期间向细胞培养物施加至少15 W/m³、至少30 W/m³、至少60 W/m³、至少100 W/m³、或至少120 W/m³的体积功率输入(volumetric power input)。

在本发明的第二方面，提供了用于制备疫苗的方法，其包括至少混合根据本发明的方法获得的病毒与药学上可接受的载体的步骤。

发明详述