[发明专利]包含脂解酶变体的组合物和方法

权利要求书

1.一种脂解酶变体或其活性片段，所述脂解酶变体或其活性片段与亲本脂解酶相比包 含至少两、三、四、五、六、七、八、九或十或更多个氨基酸修饰，其中第一氨基酸修饰在所述 脂解酶变体中选自第4、11、18、23、24、27、29、33、45、48、49、51、56、58、73、75、77、90、91、94、 111、130、137、154、156、163、187、189、227、233、252、256和264位的位置，其中所述变体的氨 基酸位置是根据与SEQIDNO:1中示出的疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosa)脂 肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。

2.根据权利要求1所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述相比于亲本脂解酶的至 少两、三、四、五、六、七、八、九或十或更多个氨基酸修饰在所述脂解酶变体中选自第4、11、 18、23、24、27、29、33、45、48、49、51、56、58、73、75、77、90、91、94、111、130、137、154、156、 163、187、189、227、233、252、256和264位的位置，其中所述变体的氨基酸位置是根据与SEQ IDNO:1中示出的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。

3.一种脂解酶变体或其活性片段，所述脂解酶变体或其活性片段与亲本脂解酶相比存 在两、三、四、五、六、七、八、九或十或更多个氨基酸修饰，其中所述两、三、四、五、六、七、八、 九或十或更多个氨基酸修饰在所述脂解酶变体中选自第4、11、18、23、24、27、29、33、45、48、 49、51、56、58、73、75、77、90、91、94、111、130、137、154、156、163、187、189、227、233、252、256 和264位的位置，其中所述变体的氨基酸位置是根据与SEQIDNO:1中示出的疏棉状嗜热丝 孢菌脂肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述变体或其活 性片段包含表2-1的氨基酸修饰，其中所述变体的氨基酸位置是根据与SEQIDNO:1中示出 的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述变体或活性 片段具有脂解活性。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的脂解酶变体或其活性片段，其中相对于所述亲本 脂解酶，所述变体或活性片段水解丁酸对硝基苯酯、辛酸对硝基苯酯或棕榈酸对硝基苯酯 的性能指数(pI)大于1.0。

7.根据权利要求6所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述性能指数是使用实施例1 的丁酸对硝基苯酯、辛酸对硝基苯酯或棕榈酸对硝基苯酯测定法测得的。

8.根据权利要求7所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述性能指数在pH8时测得。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述变体包含表 3-1中所示的氨基酸修饰，其中所述变体的氨基酸位置是根据与SEQIDNO:1中示出的疏棉 状嗜热丝孢菌脂肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。

10.根据权利要求9所述的脂解酶变体或其活性片段，其中相对于具有SEQIDNO:1序列 的参考脂解酶，所述变体或活性片段水解丁酸对硝基苯酯的性能指数(pI)大于1.0。

11.根据权利要求10所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述性能指数是使用实施 例1的丁酸对硝基苯酯测定法测得的。

12.根据权利要求11所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述性能指数在pH8时测 得。

13.根据权利要求1至8中任一项所述的脂解酶变体或其活性片段，其中所述变体包含 表3-7中所示的氨基酸修饰，其中所述变体的氨基酸位置是根据与SEQIDNO:1中示出的疏 棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的氨基酸序列的对应性进行编号的。