[发明专利]恒定链经修饰的双特异性五价和六价Ig-M抗体

权利要求书

1.一种具有五聚或六聚环结构的结合分子，其包含五个或六个双特异性结合单元，其中所述双特异性结合单元各自具有相同的两种结合特异性并且包含第一链和第二链，所述第一链至少包含与第一结合靶标的第一结合区缀合的人IgM重链恒定区的Cμ4域、Cμ3域和Cμ2域，所述第二链至少包含人IgM重链恒定区的Cμ4域、Cμ3域和Cμ2域以及第二结合靶标的第二结合区，其中所述第一结合靶标和所述第二结合靶标不同，并且其中所述第一链和所述第二链经过组装以由于它们个别IgM重链恒定区之间所产生的不对称界面而产生双特异性结合单元，其中所述内部不对称界面由以下产生：

通过钮-孔连接，其由以下组成：

钮T350Y，T354E和I397E与孔L352S，T354K，H395V和I397K；并且

其中氨基酸编号对应于SEQ ID NO:33的野生型人IgM重链恒定区。

2.如权利要求1所述的结合分子，其中所述双特异性结合单元是相同的。

3.如权利要求1或2所述的结合分子，其中所述第一结合区和所述第二结合区分别是结合至所述第一结合靶标和所述第二结合靶标的两个不同抗体重链可变区。

4.如权利要求3所述的结合分子，其还包含与所述两个不同抗体重链可变区中的至少一个缔合的至少一个IgM轻链可变区序列。

5.如权利要求4所述的结合分子，其中所述轻链可变区序列通过在所述轻链与所述重链之间产生不对称界面来偶联至其匹配重链可变区。

6.如权利要求5所述的结合分子，其中所述不对称界面通过CrossMab技术、钮-孔偶联和/或盐桥偶联来产生。

7.一种具有五聚或六聚环结构的结合分子，其包含五个或六个双特异性结合单元，其中(i)所述双特异性结合单元各自包含两个IgM重链恒定区，其各自至少包含缀合至结合靶标的结合区的Cμ2、Cμ3和Cμ4域，(ii)至少两个所述双特异性结合单元结合至不同结合靶标，(iii)内部不对称界面在各双特异性结合单元的两个IgM重链恒定区之间产生，并且(iv)外部不对称界面在结合至不同靶标的所述邻近双特异性结合单元的所述重链恒定区之间产生，其中所述内部不对称界面由以下产生：

通过钮-孔连接，其由以下组成：

钮T350Y，T354E和I397E与孔L352S，T354K，H395V和I397K；并且

其中所述外部不对称界面由Cμ3-Cμ3域中至少一个带成对电荷的氨基酸残基开关形成，其中所述带成对电荷的氨基酸残基开关是或并且

其中氨基酸编号对应于SEQ ID NO:33的野生型人IgM重链恒定区。

8.如权利要求7所述的结合分子，其中所述结合区是抗体重链可变区。

9.如权利要求8所述的结合分子，其还包含与至少一个所述结合单元中的抗体重链可变区中的至少一个缔合的至少一个IgM轻链可变区序列。

10.如权利要求9所述的结合分子，其中所述轻链可变区序列通过在所述轻链与所述重链之间产生不对称界面来偶联至其匹配重链可变区。

11.如权利要求10所述的结合分子，其中所述不对称界面通过CrossMab技术、钮-孔偶联和/或盐桥偶联来产生。

12.如权利要求1至11中任一项所述的结合分子，其中所述结合靶标选自肽、糖蛋白和核酸分子。

13.如权利要求12所述的结合分子，其中所述结合靶标选自可溶性多肽、细胞表面受体、配体、分子转运蛋白、酶和酶底物。