[发明专利]胚胎植入

说明书

本发明涉及通过在受精或胚胎植入之前提供免疫许可的子宫环境，改善雌性中胚胎植入的成功率和怀孕率的成功率的方法和组合物，所述组合物包括细胞因子。本发明的方法用于使得子宫更易于接受或较不排斥，例如，转移的胚胎、精子或其他异源移植的组织。

本发明涉及通过在受精或胚胎植入之前提供免疫许可的子宫环境，改善雌性中胚胎植入的成功率和妊娠成功率方法和组合物。本发明的方法用于使得子宫更易于接受或较不排斥，例如，转移的胚胎、精子或其他异源移植的组织。本发明尤其也包括用于本发明的方法的组合物和制剂。

背景

子宫环境，其如果是排斥的/非接收的，可造成人类和动物等中良好质量胚胎的差植入率。拒信，从失败的植入和自然流产角度，不适当的致敏子宫环境也可能是繁殖障碍的许多病例的原因。类似地，子宫致敏障碍被视为人类中妊娠并发症，比如先兆子痫和通过阻止适当的胎盘发育的胎儿生长受限的病因。

基因改变或修饰的动物提供了用于体内测试新的基因和药物疗法的有价值的模型，并且是在过去十年中动物实验的数量逐渐增加的主要原因。在英国，与1995年相比，在2011年使用基因修饰的动物进行的许多科学程序超过四倍。基因修饰的动物的使用现在代表在动物上超过50％的所有科学程序。使用的最大类别是饲养(以产生基因修饰的动物)，仅2012年在英国啮齿动物占几乎180万个程序，该数量的背景趋势是每年增加。啮齿动物中的胚胎转移支撑了转基因方法的发展、具体品系的再衍生，并且促进动物系跨长距离的转运。典型地，胚胎转移需要在受体雌性中诱导假妊娠。该现象准备了用于植入胚胎的子宫，但是，尽管诱导假妊娠，转移基因修饰的胚胎的成功率仍相对较低。

小鼠是自发排卵的并且在发情期之后可假妊娠，其中在发情期中雌性与遗传上不育的雄性比如可获得自Harlan Laboratories Inc的T145H-Re品系(其由于染色体易位是不育的)或结扎输精管的雄性交配。两组雄性都射出没有功能精子的精浆。但是，遗传上不育的和结扎输精管的小鼠都相对昂贵。在结扎输精管的雄性的情况下，不育不能确保100％有效并且需要测试每个雄性，而产生遗传上不育的雄性产生了不需要的过剩雌性。

可选地，假妊娠可通过由用人工机械刺激模拟交配获得的正常的阴道刺激诱导，例如通过振动的刻纹工具(engraving tool)(Kenney等；J Reprod.Fert.1977,49,305-309)。发现进入的次数和速度对繁殖成功具有重要作用(Diamond；Science,1970,169,4,995-997)。尽管该方法已经在大鼠和小鼠中有一些成功，但是机械刺激对诱导金地鼠(Golden Hamster)的假妊娠没有作用(Diamond等J.Reprod.Fert.1968,17,165-168)。当雌性和不育的雄性交配或机械刺激时，黄体持续而没有胚胎，导致假妊娠。雌性在假妊娠状态下，将使乳腺发育，分泌乳汁(lactate)和筑巢。需要改善诱导实验室测试动物的假妊娠状态的方法。

尽管用于在许多啮齿动物物种中胚胎转移的方案是相对成熟的，但是它们较差的优化意味着存在大量的动物损耗，其在全世界动物单位中造成许多经济和伦理问题。现有技术标准方法目前依靠使受体雌性与结扎输精管的雄性交配以诱导假妊娠，而不是机械刺激，其中交配活动和精液暴露于母体的生殖系(reproductive tract)触发神经内分泌和涉及复杂的细胞因子级联的局部的(主要位于子宫)炎症应答和准备在子宫中产生免疫许可环境的前列腺素介导的事件，从而利于胚胎植入前的发育和/或胚泡植入和建立妊娠。即使在没有受精的情况下，支持黄体发育和孕酮产生，并且母体的生理机能协同使得子宫易于接受转移的胚胎多达10-13天。该技术常规用于支持正常的(冷藏保存品系再生/再衍生)或基因修饰的(转基因/嵌合/克隆的)胚胎的发育。

但是，该方法的效力是受限的。典型地，为了该程序，与怀孕的那些雌性相比，准备了四倍多的雌性。当植入新鲜的或冷冻的胚胎时，这表示大量有价值的生物材料和努力的耗费。而且，伴随着前瞻性受体，也需要维持大量年幼的结扎输精管的雄性：这些一周可仅仅交配2-3次并且通常每6-9个月更换，以便维持性能。