[发明专利]用于生物合成异丁烯酸盐的方法在审
| 申请号： | 201480053694.3 | 申请日： | 2014-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN105705650A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | A.L.博特斯;A.V.E.康拉迪 | 申请（专利权）人： | 英威达技术有限责任公司 |
| 主分类号： | C12P7/40 | 分类号： | C12P7/40;C12N9/16;C12N9/10 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 张文辉 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 生物 合成 异丁烯 方法 | ||
1.一种生成异丁烯酸盐的方法，所述方法包括使用硫酯酶或CoA-转移 酶将异丁烯酰基-CoA酶促转化为异丁烯酸盐。
2.权利要求1的方法，其中所述硫酯酶在EC3.1.2.-下分类。
3.权利要求1的方法，其中所述硫酯酶是tesB或YciA的基因产物。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述硫酯酶与SEQIDNO:1、SEQ IDNO:2或SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
5.权利要求1的方法，其中所述CoA-转移酶在EC2.8.3.-下分类。
6.权利要求5的方法，其中所述CoA-转移酶与SEQIDNO:4或SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
7.权利要求1-5中任一项的方法，其中从丙酮酸盐酶促合成异丁烯酰基 -CoA。
8.权利要求7的方法，其中经由异丁醛从丙酮酸盐酶促合成异丁烯酰基 -CoA。
9.权利要求8的方法，其中使用一种或多种下述酶从丙酮酸盐酶促合成 异丁烯酰基-CoA：乙酰乳酸合酶；二羟基异戊酸脱氢酶；2,3-二羟基异戊酸 脱水酶；2-氧代戊酸脱羧酶；苯乙醛脱氢酶，异丁醛脱氢酶或乳醛脱氢酶； 或CoA转移酶或连接酶；或酰基-CoA脱氢酶。
10.权利要求7的方法，其中经由将2-氧代-异戊酸盐转化为异丁酰基 -CoA从丙酮酸盐酶促合成异丁烯酰基-CoA。
11.权利要求10的方法，其中使用一种或多种下述酶从丙酮酸盐酶促合 成异丁烯酰基-CoA：乙酰乳酸合酶；二羟基异戊酸脱氢酶；2,3-二羟基异戊 酸脱水酶；支链脱氢酶；或酰基-CoA脱氢酶。
12.一种生成异丁烯酸盐的方法，所述方法包括从丙酮酸盐酶促合成异 丁醛，并且将异丁醛酶促转化成异丁烯酸盐。
13.权利要求12的方法，其中使用苯乙醛脱氢酶、异丁醛脱氢酶或乳醛 脱氢酶将异丁醛转化为异丁酸，使用CoA转移酶或连接酶将异丁酸转化为异 丁酰基-CoA，使用酰基-CoA脱氢酶将异丁酰基-CoA转化为异丁烯酰基 -CoA，并且使用硫酯酶或CoA转移酶将异丁烯酰基-CoA转化为异丁烯酸。
14.权利要求13的方法，其中所述苯乙醛脱氢酶在EC1.2.1.39下分类。
15.权利要求14的方法，其中所述苯乙醛脱氢酶与SEQIDNO:8中所列 的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
16.权利要求13的方法，其中所述异丁醛脱氢酶与SEQIDNO:6中所列 的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
17.权利要求13的方法，其中所述CoA转移酶是EC2.8.3.1下分类的丙酸 CoA转移酶。
18.权利要求17的方法，其中所述丙酸CoA-转移酶与SEQIDNO:4或 SEQIDNO:5的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
19.权利要求13的方法，其中所述连接酶是EC6.2.1.13下分类的丙酸 CoA连接酶。
20.权利要求13-19中任一项的方法，其中所述酰基-CoA脱氢酶是异丁 酰基-CoA脱氢酶。
21.权利要求20的方法，其中所述异丁酰基-CoA脱氢酶与SEQIDNO:7 或SEQIDNO:9中所列的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。
22.前述权利要求中任一项的方法，其中在重组宿主中进行所述方法。
23.权利要求22的方法，其中所述宿主经受厌氧、需氧或微需氧培养条 件下的培养策略。
24.权利要求22或23的方法，其中经由氮、磷酸盐或氧限制在营养物限 制的条件下培养所述宿主。
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