[发明专利]免疫细胞及其它细胞的测定

说明书

相关申请

本申请要求2013年8月26日提交的标题为“Determinationof ImmuneCellsandOtherCells”的美国临时专利申请系列号 61/870,214(通过引用并入本文)的权益。

领域

本发明总体上涉及流体微滴，以及用于筛选或分选这样的流体微 滴的技术。在一些实施方案中，所述流体微滴可含有细胞诸如免疫细 胞，可分析所述细胞以测定细胞的受体序列或其它有用的性质。

背景

一些细胞表型是克隆性的，这意味着单个祖细胞能产生许多相同 的子细胞，每一个子细胞具有相同的表型。通常地，克隆性的表型由 特定的基因型控制。例如，T细胞在其细胞膜上呈递T细胞受体(TCR) 分子。每一个T细胞克隆编码单一序列的T细胞受体(TCR)分子。 如果T细胞表达结合于由感染的细胞或癌性细胞呈递的肽的TCR，则 可给T细胞传递信号以快速分裂。原始T细胞的此“克隆扩增”导致大 量表型相同的细胞产生，每一个细胞编码相同的TCR。在免疫应答期 间，这些克隆衍生的T细胞可被活化以杀死呈递感染或癌症衍生的肽 的细胞。以此方式，免疫系统可产生针对感染或癌症的靶向应答。

由于TCR的序列对于其识别其细胞靶的能力是重要的，因此拥 有鉴定由T细胞呈递的TCR的序列的有效方法在医学和科学上是有 用的，所述T细胞具有识别并杀死呈递从感染的细胞或癌性细胞衍生 的肽的细胞的能力。然而，迄今为止，还没有鉴定具有所需识别和杀 死活性的个体T细胞的高通量测定；因此难以鉴定介导靶细胞的识别 的TCR。

抗体分泌细胞(ASC)诸如B细胞和浆细胞也是克隆性的，因为 单个细胞编码和分泌单一种类的抗体。由对应的细胞DNA定义的抗 体的蛋白质序列决定抗体的结合特异性。迄今为止，还没有鉴定分泌 具有所需靶特异性和功能活性的抗体的个体细胞的高通量测定。因此， 难以鉴定编码这些目标抗体的DNA序列。

概述

本发明总体上涉及流体微滴，以及用于筛选或分选这样的流体微 滴的技术。在一些实施方案中，所述流体微滴可含有细胞诸如免疫细 胞，可分析所述细胞以测定所述细胞的受体序列或其它有用的性质。 本发明的主题在一些情况下涉及相关产品，针对特定问题的备选解决 方案，和/或一个或多个系统和/或物品的多个不同用途。

在一个方面，本发明总体上涉及测定免疫细胞受体的方法。根据 第一组实施方案，所述方法包括将免疫细胞和靶细胞封装在微流体通 道内包含的微流体微滴中，以使得至少一些微流体微滴含有至少一个 免疫细胞和至少一个靶细胞；测定靶细胞暴露于免疫细胞后所述靶细 胞的生存力；基于靶细胞的生存力分离微流体微滴；和对于含有至少 一个免疫细胞和至少一个无生存力靶细胞的微流体微滴，测定所述至 少一个免疫细胞的受体序列。

在另一组实施方案中，所述方法包括测定多个微流体微滴内包含 的靶细胞的生存力，所述微流体微滴的至少一些含有至少一个免疫细 胞和至少一个靶细胞；基于靶细胞的生存力分离微流体微滴；和对于 含有至少一个免疫细胞和至少一个无生存力靶细胞的微流体微滴，测 定所述至少一个免疫细胞的受体序列。

在另一组实施方案中，所述方法包括以下行为：测定多个微流体 微滴内包含的靶细胞的生存力，所述微流体微滴的至少一些含有至少 一个效应细胞和至少一个靶细胞，其中所述效应细胞与靶细胞相互作 用，以在靶细胞中产生可测定的变化；基于靶细胞的生存力分离微流 体微滴；和对于含有至少一个效应细胞和至少一个无生存力靶细胞的 微流体微滴，测定所述至少一个效应细胞的受体序列。

根据另一组实施方案，所述方法包括以下行为：将效应细胞和靶 细胞封装在微流体通道内包含的微流体微滴中，以使得至少一些微流 体微滴含有至少一个效应细胞和至少一个靶细胞，其中所述效应细胞 与靶细胞相互作用，以在靶细胞中产生可测定的变化；测定靶细胞暴 露于效应细胞后靶细胞的生存力；基于靶细胞的生存力分离微流体微 滴；和对于含有至少一个效应细胞和至少一个无生存力靶细胞的微流 体微滴，测定所述至少一个效应细胞的受体序列。