[发明专利]治疗HPV相关疾病的方法

说明书

相关申请

本申请要求保护2013年8月6日提交的美国临时专利申请系列号61/862,768的优先权的权益；所述申请的内容通过引用结合到本文中。

政府权益声明

本发明是使用NIH授予的基金号CA098252和CA114425下的政府支持进行。政府对本发明具有一定权利。

发明背景

人乳头状瘤病毒(HPV)为子宫颈、外阴、阴道、阴茎、口腔、喉和肛门癌症以及诸如肛门生殖器湿疣或生殖器疣等非致癌疾病的主要病原物质。子宫颈癌为全世界范围内第三大常见的女性癌症。鉴定HPV作为子宫颈癌的病原因子，为开发治疗性HPV疫苗以抑制已确定的HPV感染朝HPV癌前期和癌性损害的进展创造了机会。两种HPV病毒性癌蛋白E6和E7，为诱导和维持细胞转化所必需的，并且始终在HPV相关的癌症中共表达。因此，它们代表用于开发治疗性HPV疫苗的理想靶标。

子宫颈癌为一种细胞改变，其起源于子宫颈的上皮中并且最初通过慢性和进行性进展的前期损害(子宫颈上皮内瘤形成(CIN))来显现，所述损害可分为低级别和高级别鳞状上皮内损害(分别为LSIL和HSIL)。50%的HSIL将最终发展成子宫颈癌。通过人乳头状瘤病毒(HPV)癌蛋白介导的细胞周期控制上的改变，为子宫颈癌中的主要分子作用机制。HPV感染非常普遍；对于可生育的妇女的终身风险为约80%。然而，大部分妇女清除所述感染(不论HPV类型)，而并未经历不利的健康影响。子宫颈损害中最频繁涉及的HPV类型为HPV16和18，其一起导致70%的子宫颈癌病例。致癌性HPV感染为子宫颈上皮细胞的致癌性转化的必要(尽管并非充分的)因素。另外的辅助因素，例如导致病毒清除的有效免疫反应，决定HPV感染是否将导致子宫颈癌。

因此，仍然存在对用于HPV相关疾病包括子宫颈癌的更好治疗方案的需要。

发明概述

根据一个实施方案，本发明提供用于在受试者的粘膜组织中产生对抗人乳头状瘤病毒(HPV)相关疾病的免疫反应的方法，所述方法包括：a)给予所述受试者的肌肉或粘膜组织有效量的组合物，所述组合物包含由pNGVL4a-sig/E7(detox)/HSP70构成的第一疫苗构建体；和b)随后给予所述受试者的粘膜组织有效量的包含第二疫苗构建体的组合物，从而在受试者中引发对抗HPV感染的免疫反应。

根据另一个实施方案，本发明提供用于治疗受试者中的子宫颈癌的方法，所述方法包括：a)给予所述受试者的肌肉或阴道粘膜组织有效量的组合物，所述组合物包含由pNGVL4a-sig/E7(detox)/HSP70构成的第一疫苗构建体；和b)随后给予所述受试者的粘膜组织有效量的包含第二疫苗构建体的组合物，从而在受试者中引发对抗子宫颈癌的免疫反应。

附图简述

图1使用细胞内IFN-g细胞因子染色接着流式细胞术分析，阐述E7-特异性CD8+T细胞免疫反应的特征。将C57BL/6小鼠(每组5只)肌内接种pNGVL4a-sig/E7(detox)/HSP70DNA(每只小鼠50μg)初免(prime)，接着六天后腹腔内注射TA-HPV(每只小鼠1x10⁷pfu)加强免疫(boost)、DNA初免接着DNA加强免疫、仅TA-HPV或不接受疫苗接种。在最终免疫一周后，通过流式细胞术分析脾细胞。所示数据来自代表性流式细胞术分析。右上角中的数字表示10⁵个总脾细胞中CD8+IFN-y+E7-特异性T细胞的数量。

图2使用载E7肽H-2D^b四聚体（E7peptide-loadedH-2D^btetramerstaining）染色描述脾中E7-特异性CD8+T细胞的特征。经子宫颈阴道内(ICV)或肌内(IM)，将C57BL/6小鼠(每组5只)接种pNGVL4a-sig/E7(detox)/HSP70(每只小鼠50μg)初免，接着六天后给予TA-HPV(每只小鼠1x10⁷)加强免疫。在第二次免疫一周后，通过流式细胞术分析脾细胞。A.代表性流式细胞术分析。B.直方图。值显示为平均数±SD，*p<:0.05，**p<:0.01，ns，非显著的。