[发明专利]用于添加适配体至核酸的方法及用于实施所述方法的组合物

权利要求书

1.一种方法，其包括：

在足以产生产物核酸的条件下合并：

模板核糖核酸(RNA)；

模板转换寡核苷酸，所述模板转换寡核苷酸包括3'杂交结构域和包含第一测序平台适配体构建体序列的结构域；

聚合酶，所述聚合酶是逆转录酶；

使单一产物核酸的合成准备好的第一引物，所述第一引物包括第一结构域和第二结构域，所述第一结构域杂交至所述模板RNA，所述第二结构域包括与所述第一测序平台适配体构建体序列不同的第二测序平台适配体构建体序列；和

dNTP；

于反应混合物中，所述产物核酸包括各自杂交至所述单一产物核酸的相邻区的所述模板RNA和所述模板转换寡核苷酸，所述单一产物核酸的相邻区包括由所述聚合酶从所述dNTP聚合的区；和

用第一扩增引物和第二扩增引物扩增所述产物核酸，所述第一扩增引物和第二扩增引物不同，并且与不同的所述第一测序平台适配体构建体序列和所述第二测序平台适配体构建体或其互补序列杂交。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述模板RNA是信使RNA(mRNA)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述模板RNA是非-多腺苷酸化RNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法包括添加核酸序列至所述非-多腺苷酸化RNA的3’末端。

5.根据权利要求4所述的方法，其中添加至所述非-多腺苷酸化RNA的3’末端的所述核酸序列是多腺嘌呤序列。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一测序平台适配体构建体序列和第二测序平台适配体构建体序列中的每一个包括选由以下组成的组的核酸结构域：特异性结合至表面-连接的测序平台寡核苷酸的结构域、测序引物结合结构域、条形码结构域、条形码测序引物结合结构域、分子鉴定结构域及其组合。

7.一种组合物，其包含各自杂交至单一产物核酸的相邻区的模板核糖核酸(RNA)和模板转换寡核苷酸，其中所述单一产物核酸由包括一杂交至所述模板RNA的第一结构域的第一引物合成转备好；所述模板转换寡核苷酸包括3'杂交结构域和包含第一测序平台适配体构建体序列的结构域；所述第一引物还包括第二结构域，所述第二结构域包括与所述第一测序平台适配体构建体序列不同的第二测序平台适配体构建体序列；

聚合酶，所述聚合酶是逆转录酶；和

第一扩增引物和第二扩增引物，所述第一扩增引物和所述第二扩增引物不同，并且与不同的所述第一测序平台适配体构建体序列和所述第二测序平台适配体构建体序列或其互补序列杂交。

8.一种试剂盒，其包括：

模板转换寡核苷酸，所述模板转换寡核苷酸包括3'杂交结构域和包含第一测序平台适配体构建体序列的结构域；

第一-链合成引物，所述第一-链合成引物包括第一结构域和第二结构域，所述第一结构域杂交至所述模板RNA，所述第二结构域包括与所述第一测序平台适配体构建体序列不同的第二测序平台适配体构建体序列；和

模板转换聚合酶，所述模板转换聚合酶是逆转录酶；和

第一扩增引物和第二扩增引物，所述第一扩增引物和所述第二扩增引物不同，并且与不同的所述第一测序平台适配体构建体序列和所述第二测序平台适配体构建体序列或其互补序列杂交。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中所述第一-链合成引物的所述第二结构域不杂交至所述模板RNA。