[发明专利]大豆转化方法

权利要求书

1.一种鉴定从大豆种系转化体生成的芽的方法，该方法包括：

a.用转基因转化大豆植物的细胞群，其中转化细胞群包含转化的种系 细胞和转化的非种系细胞；

b.从所述转化细胞群再生芽；

c.分离从所述转化细胞群产生的芽；

d.将分离的再生芽施加于选择性生根培养基，其中(i)由转化的种系细 胞产生的施加于培养基的分离的再生芽生成有活力的根，并且(ii)由转化的非 种系细胞产生的施加于培养基的分离的再生芽不生成有活力的根；和

e.通过检测芽是否生成有活力的根来鉴定从大豆种系转化体生成的芽。

2.权利要求1的方法，其中转化采用选自下组的转化方法：土壤杆菌转 化、生物射弹法、磷酸钙转化、聚凝胺转化、原生质体融合转化、电穿孔转化、 超声波转化、脂质体转化、显微注射转化、裸DNA转化、质粒载体转化、病 毒载体转化、碳化硅介导的转化、气溶胶射束转化、或PEG转化。

3.权利要求1的方法，其中大豆植物细胞群包括大豆植物组织。

4.权利要求3的方法，其中大豆植物组织为L2/L3组织层或L1组织层。

5.权利要求4的方法，其中L2/L3组织层包含种系细胞。

6.权利要求4的方法，其中L1组织层包含非种系细胞。

7.权利要求4的方法，其中L2/L3组织层选自大豆植物分生组织、大豆 植物根组织、和大豆植物维管组织。

8.权利要求4的方法，其中L1组织层选自大豆植物皮组织、大豆植物基 本组织、和大豆植物外套组织。

9.权利要求1的方法，其中转基因包含在至少一个基因表达盒内。

10.权利要求9的方法，其中基因表达盒包含选择标志物基因。

11.权利要求10的方法，其中选择标志物基因为膦丝菌素乙酰转移酶基 因。

12.权利要求9的方法，其中基因表达盒包含性状基因。

13.权利要求9的方法，其中基因表达盒包含RNAi基因。

14.权利要求1的方法，其中选择性生根培养基包含草铵膦或2,4-D。

15.权利要求12的方法，其中选择性生根培养基中的草铵膦浓度为至少 1.0mg/L。

16.权利要求12的方法，其中选择性生根培养基中的草铵膦浓度为1.0 mg/L到10.00mg/L。

17.权利要求12的方法，其中选择性生根培养基中的草铵膦浓度为1.0 mg/L。

18.权利要求1的方法，其中选择性生根培养基包含基础盐、维生素、矿 物质、和碳源。

19.权利要求18的方法，其中基础盐选自GamborgB-5基础盐、Schenk& Hildebrandt基础盐、White基础盐、Chu(N6)基础盐、DKW/Juglans基础盐、 Hoagland2号基础盐、Murashige&Skoog基础盐，及其组合。

20.权利要求19的方法，其中基础盐为Murashige&Skoog基础盐 。

21.权利要求18的方法，其中维生素选自GamborgB-5维生素、MEM维生 素、Murashige&Skoog维生素、Schenk&Hildebrandt维生素，及其组合。

22.权利要求21的方法，其中维生素为GamborgB-5维生素。

23.权利要求18的方法，其中碳源选自葡萄糖、右旋糖、甘露糖、果糖、 半乳糖、葡糖醛酸、乳糖、甘油，及其组合。

24.权利要求23的方法，其中碳源为蔗糖。