[发明专利]一种培育雄性不育库蚊的方法

权利要求书

1.一种培育全雄性不育库蚊的方法，其中包括：

i)培育库蚊生物品系，所述库蚊品系携带一个或多个插入的Tet-on+转化子-2遗传敲除系统，以沉默内源性Tra-2基因，其中所述敲除效应仅发生在所述饲养条件下(实验室或饲养)，所述敲除系统只能通过添加所述物质激活，所述Tra-2敲除系统可以在雄性精子形成期间表达，并杀死带有X(m)染色体的精子，当X(m)染色体的精子存活时表达可杀死早期雌性受精卵，所有类型的敲除效应将产生严重的雄性偏向，雄性后代可达100％；

ii)在缺乏所述物质的情况下形成所述育种品系，因此在自然环境中的物种沉默，该物质在自然栖息地不存在，只能通过喂养提供给转化昆虫从而诱导敲除系统；

iii)所述昆虫品系还携带一个或多个内共生沃尔巴克氏体，其中雌性感染昆虫与Tet-on+Tra 2 RNAi品系雄性杂交，或通过胚胎细胞质感染昆虫，向目标物种的成年雌性的胸肌中进行微量注射，以生成人工细菌感染蚊子(所述沃尔巴克氏体不同于那些天然种群中可能已经存在的沃尔巴克氏体，如果雄性与自然种群选育的雌性昆虫杂交，可诱导胞质不相容性(Ci))，其中所述添加剂抗生素物质在Tra 2 RNAi的生命周期中的短暂存在，以允许沃尔巴克氏体可安全地保留在昆虫的品系内；

iv)将所述品系的雄性Tet-on+Tra 2 RNAi/沃尔巴克氏体后代释放至自然种群中，不需要性别鉴定步骤以清除雌性，可以通过喂养野生雌性实现种群控制，通过CI对其进行部分或全部绝育。

2.一种根据权利要求1所述的有机体，其中用于创建RNAi基因重组构建物(长dsmRNA、shRNA或miRNA)的任何序列可用于所述有机体的序列。

3.根据权利要求1和2所述的有机体，其中Tra-2RNAi效应位于任何染色体上。

4.根据权利要求1和3所述的有机体，其中整个Tra-2mRNA/cDNA基因序列可用于添加更多复制基因到基因组中，以通过过表达沉默所述基因。

5.根据权利要求1-4所述的RNAi重组构建物，其中所述构建物用于转化含有Tra-2基因序列中的已部分或全部的库蚊。

6.根据权利要求1，2和3所述的一种RNAi重组构建物，其中所述构建物用于转化库蚊，所述库蚊包括昆虫精子特异性启动子，用于调控反式激活蛋白(tTA基因)的条件，例如果蝇β2，早期受精卵启动子还可以用于在带有X(m)染色体的精子存活的条件下杀死早期雌性受精卵(例如埃及伊蚊-AaKLC2.1启动子)。

7.根据权利要求4用于转化库蚊的DNA重组构建物，其中所述构建物包含昆虫精子特异性启动子，用于调控反式激活蛋白(tTA基因)，例如果蝇β2，早期受精卵启动子还可以用于在带有X(m)染色体的精子存活的条件下杀死早期雌性受精卵(例如，埃及伊蚊-AaKLC2.1启动子)。

8.根据权利要求1，2和3所述的用于转化库蚊一种RNAi重组构建物，其中所述狗家务包含U6昆虫最小启动子，所述启动子与调控敲除效应的tetO(n)操作子序列结合。

9.一种根据任意前述权利要求的Tet-on+Tra-2RNAi系统，可用于通过辐射或化学绝育，在CI无法诱导某一物种达到100％的情况下实现绝育。

10.任何具有类似于白纹伊蚊，埃及伊蚊或库蚊等昆虫体内Tra-2遗传物质的昆虫，例如带有X染色体的精子和早期雌性受精卵，都可以在其Tra-2被敲除采用这种方法。