[发明专利]芋螺毒素肽κ-CPTx-btl05、其制备方法及应用

说明书

提供了一种芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl05及其衍生多肽，所述芋螺毒素肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。还提供了所述芋螺毒素肽的制备方法及其在治疗钙离子通道相关疾病中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地，涉及一种新的芋螺毒素肽κ-CPTx-btl05，编码该肽的多核苷酸，含有该多核苷酸的构建体、表达载体和宿主细胞，该肽的天然提取及人工合成方法，以及该肽的医药用途。

背景技术

钙离子通道是广泛分布于兴奋细胞的跨膜蛋白，调节细胞外的Ca²⁺进入细胞质，参与一系列Ca²⁺依赖的生理活动，如激素及神经递质释放、肌肉收缩和细胞信号传导等。根据对电压的敏感性不同分为低电压激活钙离子通道(LVA)或T-型钙通道(Cav3.x)和高电压激活钙离子通道(HVA)，HVA钙通道包括L-型(Cav1.x)、P/Q-型(Cav2.1)、N-型(Cav2.2)和R-型(Cav2.3)钙通道。Cav1.x通道参与肌肉收缩和细胞分泌，Cav2.x参与神经递质释放和神经元兴奋调节。钙通道由起主要功能的α亚基和辅助功能的β、γ及δ亚基组成。

钙通道阻滞剂广泛存在于动物毒液中，如蜈蚣、蜘蛛等，目前已开发出很多如二氢吡啶类小分子钙通道阻滞剂药物，典型药物有选择性钙离子阻滞剂硝苯地平，该类药物在临床上主要应用于治疗高血压、冠心病、心律失常、心绞痛、脑血管病等，属当前应用最广泛和频率较高的一类靶点药物。

然而，目前已开发的多肽类钙通道阻滞剂药物则相对较少，如齐考诺肽是一类N-型钙通道阻滞剂，用于治疗难治性慢性疼痛。多肽类钙通道阻滞剂因其众多优势，如高选择性、高亲脂性和高安全性，将成为未来钙通道阻滞剂药物开发的热点。

高血压是当今世界最常见的心血管疾病之一，也是心脑血管疾病的主要危险因素。中国疾控中心慢病防控中心公布的研究结果显示，我国高血压患者人数已突破3.3亿人，平均每3个成人中就有1人是高血压患者。一线抗高血压药物有5类，分别是钙通道阻滞剂(CCB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEⅠ)、血管紧张素受体阻滞剂(ARB)、利尿剂和β受体阻滞剂。其中，钙通道阻滞剂是目前降压药零售市场的主力军，其主要通过阻断心肌和血管平滑肌细胞膜上的钙离子通道，抑制细胞外的钙离子内流，使细胞内钙离子水平降低而引起心血管等组织平滑肌收缩率降低，血管舒张，从而降低血压。

芋螺是一类广泛分布于热带海洋的有毒动物，其毒液中含有大量的多肽类离子通道活性物质，例如ω-Conotoxin，能专一阻断电压敏感型钙离子通道，是开发多肽类钙通道阻滞剂类降压药的重要天然资源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的芋螺毒素肽κ-CPTx-btl05，编码该肽的多核苷酸，含有该多核苷酸的构建体、表达载体和转化的宿主细胞，该肽的天然提取及人工合成方法，以及该肽的医药用途。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

第一方面，本发明提供了一种芋螺毒素肽κ-CPTx-btl05，其为：

(a)如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽；

(b)如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，具有(a)多肽功能的由(a)衍生的多肽；所述被取代、添加或缺失的氨基酸中不包括半胱氨酸；所述功能为抑制钙离子通道的活性；

所述(a)和(b)多肽的氨基酸序列内含两对二硫键，其为所述多肽发挥钙离子通道抑制活性的必要条件，因此，如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中的半胱氨酸是不能被取代、添加或缺失的。

上述芋螺毒素肽κ-CPTx-btl05中，作为优选，所述一个或多个氨基酸的取代选自由以下组成的组：

(i)第2位的异亮氨酸被亮氨酸或缬氨酸取代；