[发明专利]建立抗病草鱼纯系的两筛两诱技术体系

说明书

技术领域

本发明是筛选和建立具有优良生产性能抗病草鱼纯系的新技术体系。

背景技术

草鱼是我国主要的淡水养殖鱼类，在我国水产养殖业和国民经济中占有重要的地位。但在草鱼的人工养殖中，一、二龄草鱼病害非常严重，商品鱼养殖的平均成活率不到30％，严重降低了养殖的经济效益。

长期的研究已经证明草鱼至病的主要病因是病毒性的，因此，很难找到有效的防治药物和方法。目前所用的药物治疗方法只对细菌性病害有一定作用，但会污染环境和降低所养殖草鱼的商品品质；用疫苗接种方法操作不便，效果不稳定，无法在生产实际中广泛应用。因此，培育出抗病的草鱼品系才能在根本上解决草鱼的病害问题。

三龄草鱼很少发生病害，具备很强的抗病能力，这一现象说明草鱼具有建立完善的抗病体系的能力，但草鱼抗病体系的建立非常复杂，是由多个不同基因，在多个不同层次上调控的。

一龄或者二龄草鱼在病害感染后仍会有少量个体能够存活，说明有些具有优良的抗病基因组合的草鱼个体，能在一、二龄阶段即建立起完善的抗病体系。

因此，筛选出具有优良抗病基因组合的草鱼，进而建立具有优良抗病基因组合的草鱼纯系，避免这些优良抗病基因在传代过程中因遗传分离、重组而丢失，则可以建立用于大规模生产育种的抗病草鱼品系，解决草鱼养殖中的病害难题。

用传统的遗传选育方法建立生物品种纯系需要经历数代连续近交选育。由于草鱼是大型鱼类，性成熟周期长达5年，用这种传统的遗传选育方法建立抗病草鱼品种纯系在生产实际中需要数十年甚至上百年的时间，耗费大量的人力、物力。由于选育工程的规模很难包括所有可能的基因组合，所选育的品系很可能因近交衰退而消失，不能达到育种目标。

本发明涵盖了筛选优良抗病基因组合草鱼，快速建立具有优良生产性能抗病基因组合草鱼纯系的一整套新的技术体系。经过在几个不同地区抗病能力对比养殖实验和在全中国范围内不同气候条件下10年大规模生产养殖实验表明：用这一技术体系所培育的草鱼品系比普通草鱼(1)具有明显的抗病优势，平均成活率达70％以上；(2)生长速度快10％以上，饵料转化率高；(3)商品鱼规格整齐，个体差异小。这些结果证明了本发明能快速而经济地建立具有优良生产性能的抗病草鱼品系。

发明内容

发明内容

本发明是抗病草鱼筛选，快速建立具有优良生产性能抗病草鱼纯系的整套新的技术体系。

优良抗病基因组合草鱼母本的筛选方法包括下列步骤：

取体型好、体重大于同龄草鱼平均体重10％-20的性成熟雌、雄草鱼各一条进行交配，所取得的受精卵用单独的孵化槽进行孵化，获得草鱼苗。

取足够数量的鱼苗培育到二月龄后，按成鱼养殖密度在专用池塘中养殖。专用池塘的进排水不能与其他鱼池串通，在随后的整个养殖过程中必须有严格防止外源草鱼进入的设施。

在一、二龄阶段多次将已患出血病、赤皮病等的草鱼放入专用池塘中对所养草鱼进行感染。经感染后绝大部分，甚至全部草鱼会病害死亡，极少部分草鱼能存活，从而筛选出具有抗病能力，因而具有优良抗病基因组合的草鱼。

将病死草鱼捞出进行无害化处理。筛选得到的抗病草鱼留在原来池塘中继续养殖到性成熟，作为生产用于筛选优良抗病纯合体草鱼的亲鱼。

用上述方法筛选出的抗病草鱼具有优良的抗病基因组合，但这些抗病基因大多数处于杂合状态。用其作为亲本通过两性生殖进行繁殖，这些优良抗病基因组合会按照遗传规律分离，所产生的后代大多仍然不具备抗病能力。只有基因组纯合的抗病草鱼才能将完整优良抗病基因组合遗传给每一个后代。因此，需要以上述基因杂合型抗病草鱼作为亲本进行繁殖，才能从其后代中筛选出基因纯合型抗病草鱼，避免传代时抗病基因的分离。按照遗传分离和自由组合定律，杂合体通过两性生殖所产生的后代中，n个基因都是纯合状态的几率是1/(3+1)ⁿ。假如草鱼的抗病性状由6个基因控制，则通过两性生殖近交选育的方式获得基因纯合型抗病草鱼的几率为1/(3+1)⁶＝1/4096。对于草鱼这种性成熟大5年的大型鱼类，要筛选和鉴定出如此低比例的基因纯合型个体是人力、物力以及时间上都难以承担的任务。如通过人工诱导单性生殖结合染色体人工加倍处理，则获得基因纯合型抗病草鱼的几率为1/2⁶＝1/64。通过人工诱导单性生殖比通过两性生殖可以使筛选纯合体的效率提高64倍以上，极大减少养殖试验鱼的规模和简化鉴定纯合体的实验工作量。因此，我们建立了如下通过人工诱导单性生殖和染色体人工加倍的方法，筛选和制备抗病草鱼纯合体的技术程序：