[发明专利]检测猪细小病毒5型的环介导等温扩增反应引物

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测猪细小病毒5型(PPV5)的环介导等温扩增反应引物，属于病毒分子生物学检测领域。

背景技术

随着病毒宏基因组学的研究的不断深入，新发病毒的发现的报道越来越多。近年来，猪群中DNA病毒的报道越来越多，除去经典的猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）和猪圆环病毒（porcine circovirus type ⅠandⅡ，PCV1和PCV2），还见有猪细小病毒2型（porcine parvovirus type 2，PPV2）、猪细小病毒3型（porcine parvovirus type 3，PPV3）、猪细小病毒4型（porcine parvovirus type 4，PPV4）以及多种亚型的猪博卡病毒（porcine bocavirus，PBoV）。【参考文献：Xiao CT, Giménez-Lirola LG, Jiang YH, Halbur PG, Opriessnig T. Characterization of a novel porcine parvovirus tentatively designated PPV5. PLoS One, 2013, 8(6): e65312.】

猪细小病毒5型（porcine parvovirus type 5，PPV5）最早在美国报道。【参考文献：Xiao CT, Halbur PG, Opriessnig T. Complete genome sequence of a novel porcine parvovirus (PPV) provisionally designated PPV5. 2013, Genome Announc, 1: e00021–00012.】。目前，关于PPV5的致病性的研究较小，致病机理还未见明确。所以，建立一种简单实用的检测方法对猪细小病毒5型的防控有着重要意义。

目前，在对新发病毒进行分子流行病学采用的方法有PCR方法和环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification， LAMP)反应等方法。基于分子水平对猪细小病毒5型检测常根据病毒基因特征设计特异性引物进行PCR扩增，可及时准确的进行病原鉴别诊断，但是普通的PCR以及灵敏度更高的荧光定量PCR，均需要使用精密仪器，对实验人员有较高的技术要求等，无法在基层实验室广泛使用。环介导等温扩增方法可在等温条件下进行高效、快速、高特异性的扩增靶序列。该方法特异性强，灵敏度较PCR方法高，无需PCR仪器等贵重仪器，仅需要普通水浴锅调节温度（60℃—65℃）。大大降低了检测的费用，特别适合基层和现地使用。目前，还未见针对环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification， LAMP)反应方法，但该属其他类型病毒如PPV1、PPV2和PPV4均已经有相应的LAMP检测方法。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测猪细小病毒5型的环介导等温扩增反应引物。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

所述检测猪细小病毒5型的环介导等温扩增方法的引物，是由一对外引物和一对内引物组成，其中所述的外引物由F3和B3，内引物由FIP和BIP组成。上述2对引物的序列如下：

F3：5’- GCCACACAAAAATAAACACG -3’，

B3： 5’- TTTGTACATGGGAGCAGAT -3’，

FIP：5’- TGCATAAAGACATTCTTTCAGTGGT-GAGCATGGAAAAGCACAG -3’，

BIP：5’- TGGAGGTACAATAGGTGAAGCCT-CAATAACTGCTGGATCTTGTC -3’。

本发明还提供了所述的环介导等温扩增反应引物在制备猪细小病毒5型快速诊断试剂中的用途。

本发明根据猪细小病毒5型基因组中NS1基因序列特征，设计特异性的LAMP引物，根据所设计的LAMP引物，建立一种检测猪细小病毒5型（PPV5）环介导等温扩增方法。该方法不与猪其他常见传染病发生非特异性反应，本方法适用性好，准确度高，特异性强，灵敏度高。