[发明专利]Criofolinine的生物合成方法

权利要求书

1.Criofolinine的生物合成方法，其特征在于以海南狗牙花为原料，所述的Criofolinine的结构式为:

2.根据权利要求1所述的方法，所述的方法包括如下步骤：

取晒干的海南狗牙花，加水，加热提取，过滤得滤液，滤液中加入DMEM培养基，接种大肠杆菌，在37℃培养；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入乙醇和甘露醇，搅拌，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩，分离浓缩液得到Criofolinine。

3.根据权利要求2所述的方法，水的加入量分别是海南狗牙花的8-12。

4.根据权利要求2所述的方法，所述的培养时间超过24小时。

5.根据权利要求2所述的方法，乙醇和甘露醇的加入量为稠膏重量的8-12以及0.08-0.12倍。

6.根据权利要求2所述的方法，所述的分离步骤为按照Choy-Eng Nge，et al.,Vernavosine and Vernavosine,New Pentacyclic Indole Alkaloids Incorporating Pyrroloazepine and Pyridopyrimidine Moieties Derived from a Common Yohimbine Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333中所记载的方法进行分离，具体而言，参照该文献Supporting Information S3-4页Isolation of alkaloids部分分离化合物(1)的方法进行分离。

7.Criofolinine的生物合成方法，所述的方法包括如下步骤：取晒干的海南狗牙花10g，加水100g，加热到40℃提取3个小时，过滤得滤液，滤液中加入3gDMEM培养基，接种0.1mL(10⁵/mL)大肠杆菌，在37℃培养24小时；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入10倍重量份乙醇，并加入占稠膏10％重量的甘露醇，搅拌，待稠膏充分分散，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩。