[发明专利]白芷中的活性单体化合物在抗利什曼原虫中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物活性成分，具体地说，涉及由白芷中的活性单体化合物在抗利什曼原虫中的应用。

背景技术

随着植物害虫和病原体的耐化学性不断加剧导致农药用量不断加大，迫使我们不得不去寻找新的农用杀菌剂和杀虫剂。美国环保署和欧洲食品安全局已经认定吡咯类杀菌剂是存在问题的，因为它对内分泌系统有影响，还会有肝脏毒性和其他严重的问题。因此，寻找环境友好对哺乳动物更安全低毒的农药成为现今农业发展的重要研究内容。从天然植物中有发现和研发新型抗菌剂和生物杀虫剂化合物的巨大潜能，天然植物已成为当今新药研发的重要来源。

白芷来源于伞形科多年生草本植物白芷或杭白芷的根，多年生，其性温，气芳香，味辛、微苦，始载于《神农本草经》，白芷入药始见于《本经》。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的作用，被临床广泛应用于感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带和疮疡肿痛等症，并有较好的疗效，白芷为常用中药，在多个成方中出现，同时也是一种很好的香料和调味辅料，在日常在生活中广泛使用。

利什曼原虫(Leishmania spp.)是一种很小的鞭毛虫，寄生于人体的有3种。在我国流行的是杜氏利什曼原虫(L.donovani)，它能引起黑热病，又名黑热病原虫。其生活史有两个阶段，一个阶段寄生在人体(或狗)，另一阶段寄生在白岭子体内。黑热病主要靠白蛉子传染。

杜氏利什曼原虫的无鞭毛体主要寄生在肝、脾、骨髓、淋巴结等器官的巨噬细胞内，常引起全身症状，如发热、肝脾肿大、贫血、鼻衄等。在印度，患者皮肤上常有暗的色素沉着，并有发热，故又称Kala-azar，即黑热的意思。因其致病力较强很少能够自愈，如不治疗常因并发病而死亡。

利什曼原虫病主要仍见于热带和亚热带地区，人类脏器、皮肤粘膜或皮肤感染、自轻微和自限性至严重不一。由杜氏利什曼原虫所致内脏利什曼病在免疫缺陷病人中，为一可能致死的感染。现有技术中，抗利什曼原虫一般有疫苗、天然植物提取、化学制剂抑制等方法实现，但疫苗一般要在未感染之前接种，一旦感染则无效；而天然植物中提取又存在提取工艺复杂，天然植物品种和资源较少而不具备广泛应用性；化学制剂大多为化学杀虫剂，长期广泛大量使用化学杀虫剂，易污染大气、水域、土壤，对人畜健康造成威胁，甚至中毒。还有成本高且存在较大的毒副作用等诸多局限性。

因此，亟需开发一种无毒无污染、低成本、易获得的具有抗利什曼原虫活性的有效成分。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供白芷中的活性单体化合物在抗利什曼原虫中的应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供白芷中的活性单体化合物在抗利什曼原虫中的应用，所述活性单体化合物为花椒素或别欧前胡素。

进一步地，所述花椒素的提取方法为：

白芷根(2.9kg)，打成粗粉，采用水蒸气蒸馏法得到2.2mL挥发油，过滤后，得到水提取液和残渣。水提取液(2000mL)加入70％的乙醇，水提醇沉后过滤得到水提取物浸膏157.5g。残渣晒干后，加入95％乙醇，提取2次，醇提液回收至无醇味后得到浓缩液100mL，该浓缩液用少量水分散至250mL，用乙酸乙酯进行萃取。回收溶剂，得到乙酸乙酯浸膏，置于干燥器内，备用。

乙酸乙酯浸膏(1.0g)经微波反应器进行分离，以正己烷:乙酸乙脂(100:0、90:10、80:20、70:30)进行梯度洗脱，洗脱体积1600mL，再经正己烷:乙酸乙脂(70:30、55:45、30:70、15:85、0:100)梯度洗脱，洗脱体积为800mL，流速均设为40mL/min。馏分收集在大小为16x 150mm的试管中，每个馏分收集22mL，合并相同的馏份，得到四个馏分D、F、G、H。

馏分D由薄层(TLC)检识(硅胶G板，Godin spray显色剂(5％硫酸乙醇液:1％香草醛乙醇液＝1:1))，经薄层板显色为一个紫色斑点，即化合物1(10.7mg)，纯度为98.2％。经后期鉴定为花椒素。

进一步地，所述别欧前胡素的提取方法为：

白芷根(2.9kg)，打成粗粉，采用水蒸气蒸馏法得到2.2mL挥发油，过滤后，得到水提取液和残渣。水提取液(2000mL)加入70％的乙醇，水提醇沉后过滤得到水提取物浸膏157.5g。残渣晒干后，加入95％乙醇，提取2次，醇提液回收至无醇味后得到浓缩液100mL，该浓缩液用少量水分散至250mL，用乙酸乙酯进行萃取。回收溶剂，得到乙酸乙酯浸膏，置于干燥器内，备用。